基因改造K細胞治療Ⅰ型糖尿病的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文利用糖反應性的啟動子和人胰島素基因改造K細胞,使其分泌有生物活性的成熟胰島素并能夠受葡萄糖的調控,探索代替胰島素注射或胰島移植治療Ⅰ型糖尿病的方法。 方法:將大鼠糖依賴性胰樣多肽(GIP)啟動子插入以螢蟲素酶為報告基因的載體pGL3-Basic,構建pGL3-Basic-GIP表達質粒,通過瞬時轉染細胞測定螢蟲素酶活性。將人胰島素基因置于GIP啟動子控制下,構建重組質粒pCDNA3-GIP-hIns,經脂質體介導轉染小鼠的腸

2、道內分泌腫瘤細胞系STC-1(K細胞的體外研究模型),篩選穩(wěn)定表達胰島素的細胞株。改變單克隆細胞株培養(yǎng)液中葡萄糖濃度,RIA法檢測胰島素的表達。鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型,將基因改造過的細胞株以1×107移植到糖尿病裸鼠皮下,監(jiān)測裸鼠血糖、體重及胰島素水平變化。 結果:螢蟲素酶活性測定證實葡萄糖上調GIP啟動子的轉錄活性,質粒pCDNA3-GIP-hIns轉染STC-1細胞,篩選共得到22株表達不同水平胰島素

3、的單克隆細胞(0~157.241uIU/ml/106cells/d)。當基因改造過的細胞被移植到STZ誘導的糖尿病裸鼠體內,7只移植STC-1—2細胞的治療組糖尿病裸鼠血糖下降至正常范圍,體重恢復;而移植空載體轉染細胞的對照組糖尿病裸鼠血糖始終維持在較高水平,體重持續(xù)下降。糖耐量實驗顯示治療組裸鼠利用糖的能力恢復正常,糖耐量曲線和正常組相似。 結論:上述結果表明人胰島素基因和糖反應性GIP啟動子構建的質粒轉染STC-1細胞,能夠

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