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文檔簡介
1、目的:觀察中藥復(fù)方制劑“加味四君子湯”對增齡大鼠免疫系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)作用,研究其是否具有延緩炎性衰老的功效,并對可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
方法:
(1)選取50只12月齡健康Wistar大鼠,雌雄各半,普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機(jī)分為5組,即“加味四君子湯”(以下簡稱藥物)低劑量組、中劑量組、高劑量組,陽性對照組、老年對照組,每組各10只;另選取10只3月齡的Wistar大鼠作為青年對照組。
2、(2)分別給予“加味四君子湯”1.6g/kg/d、3.2g/kg/d、6.4g/kg/d,“六味地黃丸”混懸液1.5g/kg/d,2ml蒸溜水灌胃,持續(xù)給藥90天。
(3)稱量大鼠體重后處死,觀察試驗大鼠以下指標(biāo):各組大鼠體重(BW);血清免疫球蛋白(IgG)水平;計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù);將胸腺和脾臟組織進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)改變;用免疫組化法定位并半定量檢測胸腺白介素-2(IL-2)的表達(dá)情況及脾臟腫瘤壞死因
3、子-α(TNF-α)的表達(dá)情況;利用實時熒光定量PCR方法檢測核因子-κB(NF-κBP56)mRNA的表達(dá)水平。
結(jié)果:
(1)各組大鼠體重變化:用藥前后比較,各組大鼠的體重均有增加;用藥后,藥物各組大鼠體重均較陽性對照組、老年對照組無顯著性差異。
(2)各組大鼠血清IgG水平的比較:與青年對照組相比較,增齡各組大鼠血清IgG水平均顯著降低(P<0.01);與老年對照組相比較,藥物組的IgG水
4、平顯著升高(P<0.05,P<0.01),陽性對照組IgG水平顯著升高(P<0.01);與陽性對照組相比較,藥物組的IgG水平明顯降低(P<0.01)。
(3)各組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的比較:與青年對照組相比較,增齡各組的胸腺和脾臟指數(shù)均顯著降低(P<0.01);與老年對照組相比較,藥物組胸腺指數(shù)明顯升高(P<0.01),脾臟指數(shù)無顯著性差異(P>0.05),陽性對照組胸腺指數(shù)變化無顯著性差異,脾臟指數(shù)變化無顯著性差異(
5、P>0.05);藥物組和陽性對照組脾臟指數(shù)差異不明顯,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
(4)各組大鼠胸腺、脾臟組織形態(tài)學(xué)比較:光鏡下,藥物組胸腺有不同程度的萎縮,與老年對照組相比胸腺組織被脂肪替代等病理變化程度降低,胸腺細(xì)胞分布較密,著色良好。與老年對照組相比較,藥物組脾臟的白髓和紅髓分界欠清晰,白髓略微增多,中性粒細(xì)胞數(shù)量增多,淋巴細(xì)胞排列比較疏松。
(5)各組大鼠胸腺IL-2表達(dá)水平:與青年對照組相比較,
6、增齡各組大鼠胸腺IL-2表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01);與老年對照組相比較,藥物組胸腺IL-2表達(dá)水平明顯升高(P<0.01),陽性對照組胸腺IL-2表達(dá)水平升高(P<0.01);藥物組和陽性對照組的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
(6)各組大鼠脾臟TNF-α表達(dá)水平:與青年對照組相比較,增齡各組大鼠脾臟TNF-α表達(dá)水平均明顯升高(P<0.01);與老年對照組相比較,藥物組脾臟TNF-α表達(dá)水平降低(P<
7、0.01),陽性對照組脾臟TNF-α表達(dá)水平降低(P<0.01);藥物組和陽性對照組的脾臟TNF-α表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
(7)各組大鼠脾臟NF-κBP65mRNA表達(dá)水平:與老年對照組相比較,青年大鼠NF-κBp65mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01);陽性對照組的NF-κBp65mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.05),藥物各組NF-κBp65mRNA的表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P
8、<0.01);與陽性對照組相比較,藥物低劑量組NF-κBp65mRNA的表達(dá)升高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);中、高劑量組的表達(dá)顯著升高(P<0.01)。
結(jié)論:“加味四君子湯”在大鼠增齡過程中應(yīng)用,能夠升高老齡大鼠血清IgG含量,提高胸腺指數(shù),對脾臟指數(shù)無明顯影響,提高胸腺IL-2的表達(dá)水平,降低脾臟TNF-α的表達(dá)水平,上調(diào)脾臟組織中NF-κBP65mRNA的表達(dá),提示“加味四君子湯”可能通過調(diào)控NF-κB信號通
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