四君子湯對小鼠大腸桿菌性腹瀉防治機制的研究.pdf

1、本試驗主要探討四君子湯煎劑防治小鼠大腸桿菌性腹瀉的作用機制。試驗方法：通過腹腔注射大腸桿菌建立動物腹瀉模型，將試驗小鼠分為預(yù)防組、治療組、自愈組和空白對照組，攻菌小鼠每只腹腔注射2.6億大腸桿菌O101誘發(fā)腹瀉。預(yù)防組提前5d開始用四君子湯煎劑灌胃直到試驗結(jié)束，每次灌服0.5mL，早晚各一次；治療組：造模后開始用四君子湯煎劑灌胃，早晚各一次；自愈組，僅用大腸桿菌進行造模；空白對照組，四君子湯煎劑和大腸桿菌肉湯懸液均用生理鹽水代替。每天觀

2、察小鼠的臨床癥狀，各組剖檢3只小鼠，觀察記錄剖檢變化，應(yīng)用常規(guī)切片技術(shù)、電鏡技術(shù)對各組小鼠的病理組織學(xué)變化以及超微結(jié)構(gòu)變化進行觀察，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)和PCR方法對小鼠的腸粘膜修復(fù)基因的表達情況進行研究。
　　 試驗結(jié)果如下：
　　 臨床癥狀：自愈組、治療組和預(yù)防組小鼠攻菌后8h左右出現(xiàn)腹瀉癥狀，小鼠精神沉郁，倦怠，飲食量減少，被毛逆立，腹式呼吸，排黃色稀便，眼瞼紅腫，有分泌物流出，96h后，癥狀有所好轉(zhuǎn)并逐漸恢復(fù)；與自

3、愈組相比治療組小鼠腹瀉率較低，臨床癥狀較輕；預(yù)防組臨床癥狀明顯減輕，小鼠腹瀉率顯著降低，恢復(fù)時間明顯縮短；空白對照組小鼠未見異常。
　　 剖檢變化：攻菌后，小鼠肝臟、腎臟、脾臟腫大，十二指腸有散在出血點，腸壁變薄，腸管內(nèi)充滿黃色稀薄的內(nèi)容物，膽囊充滿膽汁，胃鼓氣嚴重。120h后，剖檢變化較輕；治療組在96h后剖檢變化不明顯；預(yù)防組小鼠病變明顯減輕，肝臟、腎臟、脾臟病變消失，十二指腸出血點減少；空白對照組剖檢未見異常。
　　

4、 病理組織學(xué)變化：小鼠攻菌后，小腸絨毛斷裂，絨毛上皮細胞腫脹，部分壞死脫落，粘膜下層充血水腫，有少量炎性細胞浸潤，杯狀細胞數(shù)量增多，腸腺變性明顯。120h后，病變有所減輕并逐漸恢復(fù)。與自愈組相比治療組杯狀細胞數(shù)量變化不顯著，120h后病理變化逐漸減輕；預(yù)防組杯狀細胞數(shù)量和粘膜下層充血水腫變化不顯著，96h后逐漸恢復(fù)；空白對照組腸道組織結(jié)構(gòu)正常，絨毛排列整齊，腸腺輪廓清晰。
　　 超微結(jié)構(gòu)變化：掃描電鏡顯示攻菌后，絨毛腫脹，杯狀

5、細胞形態(tài)異常，數(shù)量增多，頂端微絨毛腫脹脫落，排列雜亂稀疏。96h后，絨毛結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)；治療組較自愈組病變較輕；預(yù)防組超微結(jié)構(gòu)病變較輕，微絨毛排列紊亂，無脫落現(xiàn)象,72h后逐漸恢復(fù)；空白對照組小腸粘膜絨毛高度一致，排列整齊，微絨毛分布均勻致密整齊，杯狀細胞數(shù)量、形態(tài)及分布均正常。透射電鏡觀察顯示，攻菌后，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張形成許多小空泡，存在胞吐現(xiàn)象和吞飲小泡。上皮微絨毛排列紊亂。線粒體空泡化，嵴和膜消失。杯狀細胞內(nèi)含有大量的粘原顆粒；96h

6、后，超微結(jié)構(gòu)病變好轉(zhuǎn)并逐漸恢復(fù)；治療組與自愈組基本相同，預(yù)防組超微結(jié)構(gòu)病變較輕；空白對照組小腸吸收上皮細胞微絨毛排列整齊，線粒體結(jié)構(gòu)正常，細胞器完整。
　　 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示：腹瀉初期，預(yù)防組、治療組和自愈組較空白對照組PCNA、TGFβ1表達量增加，其中預(yù)防組與空白對照組相比差異顯著（P<0.05）。
　　 粘膜細胞修復(fù)相關(guān)基因表達檢測結(jié)果顯示，腹瀉初期，預(yù)防組、治療組和自愈組TGFβ1、EGFR表達量較空白對