環(huán)境和遺傳因素導(dǎo)致男性不育分子機(jī)制的相關(guān)研究.pdf

1、有性生殖中,胚胎的形成始于精卵結(jié)合。由于哺乳動(dòng)物精卵細(xì)胞體積的懸殊及精子發(fā)生、成熟過(guò)程中特有的形態(tài)及細(xì)胞成分的變化,長(zhǎng)久以來(lái)廣泛認(rèn)為在受精及胚胎早期發(fā)育過(guò)程中,精子僅僅提供受精所需的雄性來(lái)源DNA。隨著近年對(duì)精子生殖功能的深入探索,已有跡象表明精子DNA和RNA在男性生育功能方面可能存在同樣重要的調(diào)控作用。為研究精子DNA和RNA對(duì)男性生育功能及其進(jìn)行輔助生育技術(shù)的影響,進(jìn)行了下列研究:
　　應(yīng)用精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性檢測(cè)(SCSA

2、)的方法檢測(cè)育齡男性精子DNA損傷,指標(biāo)分別為DNA碎片指數(shù)(DFI)和高DNA著色性(HDS),探討吸煙對(duì)育齡男性精子質(zhì)量,尤其是精子DNA損傷的影響。該研究發(fā)現(xiàn)吸煙≥20支/日和吸煙年限≥10年的患者組精液量、前向運(yùn)動(dòng)精子比例低于且精子畸形率顯著增高(P＜0.05);吸煙組與非吸煙組相比,平均DFI(11.6±8.9％VS9.3±8.4％)和HDS值(13.6±11.2VS7.8±9.1％)均有上升(P＜0.05)。提示吸煙≥20支

3、/日和吸煙年限≥10對(duì)精子DNA完整性和核成熟度有不良影響。
　　比較精子DNA不同損傷程度對(duì)各項(xiàng)輔助生育技術(shù)治療結(jié)局的影響。將DFI正常閾值設(shè)為≤27％,HDS正常閾值設(shè)為≤15％。按以下標(biāo)準(zhǔn)分別分組比較,組1為DFI≤27％且HDS≤15％,組2為DFI＞27％且HDS≤15％,組3為DFI≤27％且HDS＞15％,組4為DFI＞27％且HDS＞15％。IUI治療周期中,與組1相比,組2和組3患者妊娠率有降低趨勢(shì),但各組比較妊

4、娠結(jié)局未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;ROC(受試者工作曲線)顯示DFI＞20.6％或HDS＞35.5％時(shí),進(jìn)行IUI治療獲得妊娠的可能性＜5％。
　　精子DFI＞27％的男性進(jìn)行IVF助孕時(shí),受精率、可用胚胎率和新鮮周期移植后妊娠率沒(méi)有明顯降低,但優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯下降;其day3的胚胎碎片程度增加。精子HDS＞15％的男性進(jìn)行ICSI助孕時(shí),受精率低于正常組男性,但其可用胚胎率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及新鮮周期移植后妊娠率沒(méi)有明顯降低。三種方式中精子DFI

5、和HDS指標(biāo)同時(shí)異常者均未獲得妊娠,提示DFI和HDS聯(lián)合指標(biāo)對(duì)男性生育力的預(yù)測(cè)價(jià)值可能更大。
　　通過(guò)對(duì)人精子RT-PCR的研究表明,精子細(xì)胞特異表達(dá)的新基因hssp411在男性精子mRNA中存在多態(tài)性,兩種異構(gòu)體在不同男性精子中的表達(dá)存在差異,約有90％的男性精子mRNA中有異構(gòu)體5的表達(dá):僅有10％的男性基因異構(gòu)體5缺失表達(dá):兩種異構(gòu)體在同一男性精子中的表達(dá)量也存在差異,異構(gòu)體5占主導(dǎo),其mRNA表達(dá)量大大高于異構(gòu)體4;hs

6、sp411基因組體外重組表達(dá)研究發(fā)現(xiàn),盡管hssp411mRNA有兩種異構(gòu)體存在,但最后的蛋白表達(dá)僅有一種(異構(gòu)體5的表達(dá)產(chǎn)物),因此精子mRNA中是否有異構(gòu)體5的表達(dá)可能是男性不育的一個(gè)分子標(biāo)志,可為男性不育的病因診斷提供新的思路。
　　原發(fā)性纖毛運(yùn)動(dòng)障礙(primary ciliary dyskinesia,PCD)是一種基因突變?cè)斐傻睦w毛運(yùn)動(dòng)障礙性疾病?；颊呔罕憩F(xiàn)無(wú)或極少活動(dòng)精子,須借助ICSI技術(shù)獲得后代,但其受精率很不

7、穩(wěn)定。我們通過(guò)透射電鏡診斷7例PCD男性,均存在纖毛超微結(jié)構(gòu)異常;通過(guò)熱點(diǎn)基因測(cè)序,尋找突變位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)5例PCD患者在編碼外動(dòng)力臂的DNAH5基因中存在相同的突變位點(diǎn)248315G-C,這是國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道的;對(duì)8個(gè)ICSI周期的妊娠結(jié)局和精子質(zhì)膜完整性及精子來(lái)源的相關(guān)性進(jìn)行分析。
　　4個(gè)周期使用自然射精,3個(gè)周期使用TESA精子,還有1個(gè)周期同時(shí)采用自然射精和TESA精子進(jìn)行授精。8個(gè)周期總共獲得成熟的MII卵子73枚,平均受精