黃連與吳茱萸配伍抗腫瘤相互作用的初步研究.pdf

1、目的：研究黃連與吳茱萸及其主要成分相互配伍在抗腫瘤作用上的協(xié)同作用及機(jī)制。 方法：本研究主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行： （1）活性成分配伍的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)。黃連和吳茱萸的主要成分小檗堿與吳茱萸堿配伍給藥作用于人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，MTT法測(cè)定二者相互作用對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖作用，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，AO：EB雙熒光染色觀察細(xì)胞的凋亡形態(tài)，并測(cè)定細(xì)胞上清液中TNF-α的含量及DNA ladder分析。 （2）黃連

2、和吳茱萸配伍的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)。建立S180實(shí)體瘤模型，昆明種小鼠右腋下接種0．2 mL S180細(xì)胞懸液（5×106個(gè)/mL細(xì)胞）后，24 h后分別灌胃左金丸（850．8mg生藥材/kg）、黃連（729．2 mg生藥材/kg）和吳茱萸（121．6 mg生藥材/kg）提取物10 d，觀察小鼠體重、脾指數(shù)，計(jì)算抑瘤率和生命延長(zhǎng)率（ILS），檢測(cè)血清中ACP、AKP、CK、ALD和LDH的酶活力，并采用免疫組化法分析P53和Bax蛋白的表達(dá)情

3、況。 （3）黃連和吳茱萸配伍逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞獲得性多藥耐藥實(shí)驗(yàn)。采用PFC方案建立小鼠S180多藥耐藥細(xì)胞模型，將耐藥后的S180細(xì)胞懸液以每只小鼠0．2 mL接種于腹腔，黃連（729．2 mg生藥材/kg）、吳茱萸（121．6 mg生藥材/kg）及左金丸（850．8 mg生藥材/kg）提取物灌胃給藥10 d，觀察小鼠體重、脾指數(shù)、肝指數(shù)、生命延長(zhǎng)率（ILS）、流式細(xì)胞儀測(cè)定P-糖蛋白（P-gp）的表達(dá)率并檢測(cè)血清中腫瘤標(biāo)志物的酶活

4、力及細(xì)胞中Caspase-3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)小檗堿（0．015 μmol/mL）和吳茱萸堿（0．045μmol/mL）配伍給藥對(duì)SMMC-7721腫瘤細(xì)胞的增殖作用明顯強(qiáng)于二者單獨(dú)給藥（P<0．01），TNF-α的表達(dá)也顯著升高（P<0．05），同時(shí)，小檗堿和吳茱萸堿配伍治療的SMMC-7721腫瘤細(xì)胞基因組DAN電泳顯出高分子量的DNA片段。在體內(nèi)試驗(yàn)中，左金丸對(duì)移植性小鼠S180腫瘤的抑瘤率為50．54%，

5、ILS為64．91%，具有保護(hù)免疫系統(tǒng)功能作用，并且可顯著提高小鼠血清中ACP（126．72±11．16 U/100mL）和AKP（67．27±13．49 U/100mL）的酶活力，顯著降低CK（20．65±4．28 U/mL）、ALD（319．13±53．87 U/L）和LDH（1029．04±468．56 U/L）的酶活力，與黃連和吳茱萸單獨(dú)給藥有著顯著性差異（P<0．01）；此外，左金丸可顯著提高P53和Bax蛋白的表達(dá)，作用強(qiáng)于

6、黃連、吳茱萸單獨(dú)使用。在逆轉(zhuǎn)S180腹水型小鼠獲得性多藥耐藥試驗(yàn)中，左金丸給藥組對(duì)小鼠S180多藥耐藥細(xì)胞的增長(zhǎng)有明顯的抑制作用，能有效降低肝指數(shù)、提高脾指數(shù)、延長(zhǎng)ILS （60．26%），也能有效逆轉(zhuǎn)S180腫瘤細(xì)胞中P-gp的表達(dá)率（2．69%）至接近正常水平（1．65%），而顯著低于模型組（16．07%），也強(qiáng)于黃連（5．69%）及吳茱萸（9．15%）單獨(dú)給藥時(shí)的逆轉(zhuǎn)效果；同時(shí)左金丸能有效降低小鼠血清中ALD （75．94±12．

7、47 U/L）和LDH（1632．92±494．48 U/L）的酶活力，提高ACP（103．28±10．36 U/100mL）和AKP（34．56±4．91 U/100mL）的酶活力，與黃連、吳茱萸給藥組比較有顯著性差異（P<0．01）。同時(shí)，采用Western Blot方法測(cè)定了給藥組及對(duì)照組小鼠腫瘤細(xì)胞中Caspase-3的表達(dá)，左金丸可有效促進(jìn)Caspase-3的表達(dá)，作用明顯強(qiáng)于黃連和吳茱萸。 結(jié)論：本研究揭示了：