白細胞介素18受體和Fas配體在腎移植中的表達及其臨床意義.pdf

1、白細胞介素18(IL-18)是最近發(fā)現(xiàn)的細胞因子，其結構與IL-1相似，在T細胞的活化中有重要作用。IL-18的活性是通過IL-18受體(IL-18R)復合物而實現(xiàn)的。IL-18R復合物由一個被稱為結合鏈的α鏈和一個被稱為信號鏈的β鏈組成。IL-18參予先天性和獲得性免疫作用。IL-18可以促進Fas-FasL介導的NK細胞毒性作用。血清IL-18的水平對急性移植物抗宿主病(aGVHD)有較高的敏感性和特異性，提示IL-18在aGVHD

2、病理過程中起重要作用，并且血清IL-18的水平對預測aGVHD有非常重要的價值。IL-18在活體肝移植急性排斥反應、誘導異種基因心臟移植方面都起著十分重要的作用；但IL-18及其受體在腎臟移植中的作用目前研究較少。 研究目的 一.檢測免疫抑制劑環(huán)孢素A(CsA)與普樂可復(Tac)對大鼠血清及脾組織懸液白介素18(IL-18)及IL-10含量的影響，探討CsA和Tac抗排斥反應的不同作用機理。 二.探討白細胞介素

3、18受體(IL-18R)、CD30抗原及Fas配體(FasL)在移植腎急、慢性排斥反應中的局部表達及其臨床意義。 三.檢測尿毒癥患者腎移植前后外周血白細胞介素18受體(IL-18R)及Fas配體(FasL)的變化，探討IL-18R及FasL在腎移植急性排斥反應中的作用。 研究內(nèi)容和方法 一.利用大鼠模型，模擬臨床用藥，將60只大鼠隨機分為3組，每組20只：CsA組：CsA灌胃，30mg/kg.d；Tac組：Tac

4、灌胃，0.6mg/kg.d。對照組：生理鹽水灌胃，3ml/kg.d。實驗周期為2周。用ELISA法測定大鼠外周血及脾組織懸液中IL-18、IL-10含量，用自動生化分析儀測定肝腎功能。 二.采用鏈霉親合素-過氧化物酶(S-P)免疫組織化學法檢測44例移植腎切除標本(其中超急性排斥反應8例，急性排斥反應16例，慢性排斥反應12例和非免疫因素導致腎功能損害8例)及6例正常腎組織中IL-18R、CD30及FasL的表達。采用半定量方法

5、對各種原因?qū)е履I功能損害與正常腎組織中IL-18R、CD30及FasL的表達進行比較。 三.根據(jù)臨床情況，將受試者分為：尿毒癥組(n=32)，腎功能穩(wěn)定組(n=24)，急性排斥組(n=8)，長期存活組(n=12)和健康對照組(n=7)。提取受試者的外周血淋巴細胞，加入雙熒光標記的鼠抗人CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL單克隆抗體，利用流式細胞儀進行測定，計算機分析打印結果。 研究結果

6、 一.Tac組大鼠血清及脾組織懸液IL-10含量均明顯降低，與對照組比較，差異有顯著性(p均＜0.05)；IL-18含量明顯降低，與對照組比較，差異有顯著性(p均＜0.05)。而CsA組血清及脾組織懸液IL-18與對照組比較明顯降低(p＜0.01)，IL-10含量與對照組比較無明顯差異(p＞0.05)。 二.IL-18R表達主要發(fā)生在腎小管上皮細胞，胞漿表達為主。正常對照組腎小管上皮細胞表達為+～2+，腎小球系膜細胞無表達。超急

7、性排斥反應、急性排斥反應組腎小管上皮細胞及腎小球系膜細胞的表達明顯增強，腎小管為2+～3+，腎小球為+～2+。慢性排斥反應組隨著腎單位的減少、腎小球、腎小管的萎縮，其表達IL-18R均減弱。正常對照組腎小球、腎小管上皮細胞均無CD30抗原表達。8例超急性排斥反應者中有4例腎小球系膜細胞CD30(+)，其余所有受檢組織腎小球系膜細胞均無CD30抗原表達。CD30陽性均表現(xiàn)為胞漿表達。腎小管上皮細胞CD30抗原表達多見于超急性排斥反應組和急

8、性排斥反應組。慢性排斥反應組及其他組腎小管上皮細胞CD30抗原表達較少。正常腎組織腎小球系膜細胞、腎小管上皮細胞均無FasL抗原的表達。超急性排斥反應腎組織腎小球、腎小管上皮細胞表達FasL明顯增強，急性排斥反應和非免疫因素導致腎功能損害者，腎小球系膜細胞表達FasL表達較弱，多為-～+。上述各組中均可見腎小管上皮細胞表達FasL抗原，多為+～2+。而在慢性排斥反應組中，無論腎小球系膜細胞還是腎小管上皮細胞，F(xiàn)asL抗原的表達均較超急性

9、、急性排斥組減弱。 三.CD4/IL-18Rα和CD8/IL-18Rα在健康對照組(n=7)中的陽性率分別為(5.9±3.4)％和(14.9±4.6)％，而在尿毒癥組的陽性率分別為(17.6±9.7)％和(28.0±5.6)％，兩組比較差別有顯著性(P=0.02，P=0.04)。CD3/FasL在正常對照組和尿毒癥組的陽性率分別為(2.9±1.3)％和(4.6±2.1)％。分別以27.3％、33.6％和6.7％作為CD4/IL-

10、18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL的95％可信限。以三者同時高于此可信限作為臨界值，判斷腎移植術后恢復情況。同時低于臨界值者26例，恢復順利者22例，占84.6％(22/26)；同時高于臨界值者6例，術后恢復順利者2例，占33.3％(2/6)。兩者比較，P＜0.05。術后恢復順利者及術后長期存活者外周血CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα和CD3/FasL的表達明顯低于急性排斥反應患者。排斥反應發(fā)生時外周血CD

11、4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα和CD3/FasL的陽性率分別為(31.9±11.6)％，(45.7±14.7)％和(7.4±2.8)％，明顯高于腎功能正常組；激素沖擊治療后其陽性率分別為(4.6±1.7)％，(11.2±3.8)％和(1.9±1.6)％，與激素沖擊治療前比較明顯降低。 實驗結論 一.應用Tac后，大鼠血清及脾組織懸液IL-10含量降低可能是其與CsA不同的抗排斥反應能力的原因之一。 二

12、.細胞凋亡在超急性、急性排斥反應導致的移植腎損害中起重要作用。IL-18R、CD30抗原和FasL可能參與移植腎超急性、急性排斥反應過程。檢測IL-18R、CD30抗原和FasL可為評價移植腎病理改變和腎移植預后提供又一重要參數(shù)。 三.利用流式細胞技術檢測尿毒癥患者腎移植前后外周血CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL的變化，可以較早預測腎移植后急性排斥反應，預測腎移植后恢復情況，評估排斥反應對激素治療