白細(xì)胞介素18受體和Fas配體在腎移植中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、白細(xì)胞介素18(IL-18)是最近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)與IL-1相似，在T細(xì)胞的活化中有重要作用。IL-18的活性是通過(guò)IL-18受體(IL-18R)復(fù)合物而實(shí)現(xiàn)的。IL-18R復(fù)合物由一個(gè)被稱為結(jié)合鏈的α鏈和一個(gè)被稱為信號(hào)鏈的β鏈組成。IL-18參予先天性和獲得性免疫作用。IL-18可以促進(jìn)Fas-FasL介導(dǎo)的NK細(xì)胞毒性作用。血清IL-18的水平對(duì)急性移植物抗宿主病(aGVHD)有較高的敏感性和特異性，提示IL-18在aGVHD

2、病理過(guò)程中起重要作用，并且血清IL-18的水平對(duì)預(yù)測(cè)aGVHD有非常重要的價(jià)值。IL-18在活體肝移植急性排斥反應(yīng)、誘導(dǎo)異種基因心臟移植方面都起著十分重要的作用；但I(xiàn)L-18及其受體在腎臟移植中的作用目前研究較少。 研究目的 一.檢測(cè)免疫抑制劑環(huán)孢素A(CsA)與普樂(lè)可復(fù)(Tac)對(duì)大鼠血清及脾組織懸液白介素18(IL-18)及IL-10含量的影響，探討CsA和Tac抗排斥反應(yīng)的不同作用機(jī)理。 二.探討白細(xì)胞介素

3、18受體(IL-18R)、CD30抗原及Fas配體(FasL)在移植腎急、慢性排斥反應(yīng)中的局部表達(dá)及其臨床意義。 三.檢測(cè)尿毒癥患者腎移植前后外周血白細(xì)胞介素18受體(IL-18R)及Fas配體(FasL)的變化，探討IL-18R及FasL在腎移植急性排斥反應(yīng)中的作用。 研究?jī)?nèi)容和方法 一.利用大鼠模型，模擬臨床用藥，將60只大鼠隨機(jī)分為3組，每組20只：CsA組：CsA灌胃，30mg/kg.d；Tac組：Tac

4、灌胃，0.6mg/kg.d。對(duì)照組：生理鹽水灌胃，3ml/kg.d。實(shí)驗(yàn)周期為2周。用ELISA法測(cè)定大鼠外周血及脾組織懸液中IL-18、IL-10含量，用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肝腎功能。 二.采用鏈霉親合素-過(guò)氧化物酶(S-P)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)44例移植腎切除標(biāo)本(其中超急性排斥反應(yīng)8例，急性排斥反應(yīng)16例，慢性排斥反應(yīng)12例和非免疫因素導(dǎo)致腎功能損害8例)及6例正常腎組織中IL-18R、CD30及FasL的表達(dá)。采用半定量方法

5、對(duì)各種原因?qū)е履I功能損害與正常腎組織中IL-18R、CD30及FasL的表達(dá)進(jìn)行比較。 三.根據(jù)臨床情況，將受試者分為：尿毒癥組(n=32)，腎功能穩(wěn)定組(n=24)，急性排斥組(n=8)，長(zhǎng)期存活組(n=12)和健康對(duì)照組(n=7)。提取受試者的外周血淋巴細(xì)胞，加入雙熒光標(biāo)記的鼠抗人CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL單克隆抗體，利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算機(jī)分析打印結(jié)果。 研究結(jié)果

6、 一.Tac組大鼠血清及脾組織懸液IL-10含量均明顯降低，與對(duì)照組比較，差異有顯著性(p均＜0.05)；IL-18含量明顯降低，與對(duì)照組比較，差異有顯著性(p均＜0.05)。而CsA組血清及脾組織懸液IL-18與對(duì)照組比較明顯降低(p＜0.01)，IL-10含量與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(p＞0.05)。 二.IL-18R表達(dá)主要發(fā)生在腎小管上皮細(xì)胞，胞漿表達(dá)為主。正常對(duì)照組腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)為+～2+，腎小球系膜細(xì)胞無(wú)表達(dá)。超急

7、性排斥反應(yīng)、急性排斥反應(yīng)組腎小管上皮細(xì)胞及腎小球系膜細(xì)胞的表達(dá)明顯增強(qiáng)，腎小管為2+～3+，腎小球?yàn)?～2+。慢性排斥反應(yīng)組隨著腎單位的減少、腎小球、腎小管的萎縮，其表達(dá)IL-18R均減弱。正常對(duì)照組腎小球、腎小管上皮細(xì)胞均無(wú)CD30抗原表達(dá)。8例超急性排斥反應(yīng)者中有4例腎小球系膜細(xì)胞CD30(+)，其余所有受檢組織腎小球系膜細(xì)胞均無(wú)CD30抗原表達(dá)。CD30陽(yáng)性均表現(xiàn)為胞漿表達(dá)。腎小管上皮細(xì)胞CD30抗原表達(dá)多見(jiàn)于超急性排斥反應(yīng)組和急

8、性排斥反應(yīng)組。慢性排斥反應(yīng)組及其他組腎小管上皮細(xì)胞CD30抗原表達(dá)較少。正常腎組織腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞均無(wú)FasL抗原的表達(dá)。超急性排斥反應(yīng)腎組織腎小球、腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)FasL明顯增強(qiáng)，急性排斥反應(yīng)和非免疫因素導(dǎo)致腎功能損害者，腎小球系膜細(xì)胞表達(dá)FasL表達(dá)較弱，多為-～+。上述各組中均可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)FasL抗原，多為+～2+。而在慢性排斥反應(yīng)組中，無(wú)論腎小球系膜細(xì)胞還是腎小管上皮細(xì)胞，F(xiàn)asL抗原的表達(dá)均較超急性

9、、急性排斥組減弱。 三.CD4/IL-18Rα和CD8/IL-18Rα在健康對(duì)照組(n=7)中的陽(yáng)性率分別為(5.9±3.4)％和(14.9±4.6)％，而在尿毒癥組的陽(yáng)性率分別為(17.6±9.7)％和(28.0±5.6)％，兩組比較差別有顯著性(P=0.02，P=0.04)。CD3/FasL在正常對(duì)照組和尿毒癥組的陽(yáng)性率分別為(2.9±1.3)％和(4.6±2.1)％。分別以27.3％、33.6％和6.7％作為CD4/IL-

10、18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL的95％可信限。以三者同時(shí)高于此可信限作為臨界值，判斷腎移植術(shù)后恢復(fù)情況。同時(shí)低于臨界值者26例，恢復(fù)順利者22例，占84.6％(22/26)；同時(shí)高于臨界值者6例，術(shù)后恢復(fù)順利者2例，占33.3％(2/6)。兩者比較，P＜0.05。術(shù)后恢復(fù)順利者及術(shù)后長(zhǎng)期存活者外周血CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα和CD3/FasL的表達(dá)明顯低于急性排斥反應(yīng)患者。排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)外周血CD

11、4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα和CD3/FasL的陽(yáng)性率分別為(31.9±11.6)％，(45.7±14.7)％和(7.4±2.8)％，明顯高于腎功能正常組；激素沖擊治療后其陽(yáng)性率分別為(4.6±1.7)％，(11.2±3.8)％和(1.9±1.6)％，與激素沖擊治療前比較明顯降低。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 一.應(yīng)用Tac后，大鼠血清及脾組織懸液IL-10含量降低可能是其與CsA不同的抗排斥反應(yīng)能力的原因之一。 二

12、.細(xì)胞凋亡在超急性、急性排斥反應(yīng)導(dǎo)致的移植腎損害中起重要作用。IL-18R、CD30抗原和FasL可能參與移植腎超急性、急性排斥反應(yīng)過(guò)程。檢測(cè)IL-18R、CD30抗原和FasL可為評(píng)價(jià)移植腎病理改變和腎移植預(yù)后提供又一重要參數(shù)。 三.利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)尿毒癥患者腎移植前后外周血CD4/IL-18Rα、CD8/IL-18Rα及CD3/FasL的變化，可以較早預(yù)測(cè)腎移植后急性排斥反應(yīng)，預(yù)測(cè)腎移植后恢復(fù)情況，評(píng)估排斥反應(yīng)對(duì)激素治療