白細(xì)胞介素-10對(duì)大鼠內(nèi)毒素誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性葡萄膜炎的治療作用.pdf

1、背景與目的: 葡萄膜炎是一種病因復(fù)雜的疾病，愈來愈多的證據(jù)表明其發(fā)病過程中有多種細(xì)胞因子參與，抗炎因子與促炎因子的失衡被認(rèn)為是其中重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。白細(xì)胞介素-10(IL-10)是一種強(qiáng)有力的抗炎物質(zhì)，它可抑制輔助性T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子及其活性，抑制趨化因子、細(xì)胞粘附因子、活性氧和氮介質(zhì)等細(xì)胞活性物質(zhì)的生成。研究表明IL-10作為一種有效的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)因子在多種炎癥中發(fā)揮重要的保護(hù)作用。能否將IL-10應(yīng)用于葡萄膜炎的治療，目前國(guó)外

2、報(bào)道尚不多見，國(guó)內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究應(yīng)用大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)免疫Wistar大鼠建立實(shí)驗(yàn)性內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎疾病模型(ElU)，該模型可作為人類全葡萄膜炎的動(dòng)物模型，為葡萄膜炎免疫機(jī)制及治療的實(shí)驗(yàn)研究提供前提。在制備的葡萄膜炎模型中全身使用白細(xì)胞介素-10，觀察其對(duì)臨床表現(xiàn)、組織學(xué)改變以及眼內(nèi)液和血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、IL-6和IL-10水平變化的影響，探討IL-10對(duì)EIU的治療作用。 方法:

3、1．建立內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎動(dòng)物模型 選擇15只6～8周齡的雄性Wistar大鼠，體重150～180克。按隨機(jī)的原則分為空白對(duì)照組(3只)和實(shí)驗(yàn)組(12只)。將LPS溶于無菌生理鹽水中，使之終濃度為2 mg/ml，分別取75μl該溶液注射至實(shí)驗(yàn)組Wistar大鼠的雙后足墊部，每只大鼠的注射總量達(dá)到300μg。對(duì)照組大鼠雙后足墊注射等量無菌生理鹽水。分別在不同的時(shí)段觀察眼部臨床改變?nèi)绾缒こ溲?、前房閃輝、房水細(xì)胞和前房滲出等，根據(jù)修

4、改的Hoekzema等的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠EIU的臨床表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)與記分。在LPS注射后24小時(shí)、3天、7天各處死EIU大鼠5只，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，參照Tilton等的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠EIU的病理改變進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)。 2．白細(xì)胞介素-10對(duì)大鼠內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎的治療作用 (1)選擇6～8周齡的雄性Wistar大鼠54只。按隨機(jī)的原則分為三組：空白對(duì)照組(A組6只)、EIU組(陽(yáng)性對(duì)照組，B組24只)和IL-10治療組(C組2

5、4只)，每組又分為免疫后4小時(shí)、24小時(shí)和3天三個(gè)亞組。 (2)A組大鼠雙后足墊注射無菌生理鹽水；B組大鼠每只雙后足墊注射大腸桿菌內(nèi)毒素300μg；C組分別于注射大腸桿菌內(nèi)毒素前4.0小時(shí)、0.5小時(shí)按1μg/kg體重尾靜脈內(nèi)注射重組IL-10，再雙后足墊注射大腸桿菌內(nèi)毒素300μg。 (3)臨床及組織學(xué)檢查：Wistar大鼠免疫后每2小時(shí)進(jìn)行裂隙燈及眼底鏡觀察，詳細(xì)記錄其發(fā)病時(shí)間、高峰時(shí)間、炎癥持續(xù)時(shí)間及臨床表現(xiàn)等，根

6、據(jù)臨床評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠眼部炎癥表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)與記分。分別于免疫后4小時(shí)、24小時(shí)和3天于大鼠內(nèi)眥靜脈叢取血，處死大鼠后取眼球。一只眼球取眼內(nèi)液進(jìn)行細(xì)胞因子測(cè)定，另一只眼球常規(guī)做病理切片，光學(xué)顯微鏡下觀察病理改變，并參照修改的病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠進(jìn)行分級(jí)。 (4)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EL,ISA法)檢測(cè)血清和眼內(nèi)液中的IL-6、IL-10和TNF-α含量。 (5)統(tǒng)計(jì)方法：全部數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSSl1

7、.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)論: 大腸桿菌內(nèi)毒素在Wistar大鼠誘導(dǎo)出嚴(yán)重的類似于人類全葡萄膜炎的動(dòng)物模型。該方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、重復(fù)性好、發(fā)病率高，這為進(jìn)一步研究葡萄膜炎的免疫機(jī)制及治療方法奠定了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)本研究就內(nèi)毒素誘導(dǎo)葡萄膜炎(EIU)與S抗原誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)進(jìn)行了比較并初步探討了LPS的免疫作用機(jī)制。 IL-10作為炎性細(xì)胞因子合成的抑制因子，全身使用能顯著抑制內(nèi)毒素