常用神經(jīng)毀損藥物局部注射對大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)學及功能的影響.pdf

1、目的：疼痛是組織損傷或與潛在的組織損傷相關(guān)的一種不愉快的軀體感覺和情感經(jīng)歷，同時可伴有代謝、內(nèi)分泌、呼吸、循環(huán)及心理學的改變。目前用于治療慢性疼痛的藥物和方法很多，但由于疼痛常涉及人體多個系統(tǒng)，人們對疼痛性疾病的發(fā)病機理及止痛藥物作用機制的認識還遠遠不足，難以完全保證神經(jīng)毀損藥的療效及應(yīng)用的安全性。本實驗將臨床上常用的幾種神經(jīng)毀損藥物注射于鼠的坐骨神經(jīng)周圍或神經(jīng)鞘內(nèi)，選取不同的時間點觀察坐骨神經(jīng)的形態(tài)學及超微結(jié)構(gòu)的變化，并測定鼠坐骨神經(jīng)

2、傳導速度，從而進一步明確常用神經(jīng)毀損藥物的作用機理，為臨床上更為合理的選擇神經(jīng)毀損藥物提供理論依據(jù)。 方法： 1.動物選擇與分組：取鼠齡為5-6周的成年雄性SD大鼠105只，體重350-380g。隨機分為7組，每組15只：正常對照組(A組)、阿霉素組(B組)、無水乙醇組(C組)、8％酚甘油組(D組)、10％酚甘油組(E組)、12％酚甘油組(F組)、慶大霉素組(G組)。每個組再隨機分為術(shù)后7、14、21d 3個亞組，每亞組

3、5只，分別取材觀察。 2.手術(shù)及注射方法：腹腔注射水和氯醛350mg/kg麻醉后，無菌條件下作臀部斜切口，在手術(shù)顯微鏡下于臀肌間隙顯露雙側(cè)坐骨神經(jīng)，選擇坐骨神經(jīng)穿入半膜肌處注射。用30G針頭穿刺，左側(cè)坐骨神經(jīng)鞘內(nèi)注射不同藥液0.02ml(A組注入0.9％生理鹽水；B組注入阿霉素5mg/ml；C組注入無水乙醇；D組注入8％酚甘油；E組注入10％酚甘油；F組注入12％酚甘油；G組注入慶大霉素800U；右側(cè)坐骨神經(jīng)神經(jīng)周圍注射相同藥液

4、0.2ml。用可吸收縫線縫合切口。 3.觀察指標：(1)神經(jīng)表面大體觀察：各亞組分別于取材前肉眼觀察神經(jīng)外觀變化；(2)運動功能大體觀察：注射后觀察各組大鼠的后肢運動功能；(3)組織學觀察：各亞組分別于術(shù)后7d、14d、21d，取注射點上、下各10mm的坐骨神經(jīng)，分別做HE染色和嗜銀染色，觀測神經(jīng)橫切面軸突數(shù)目、密度，以及髓鞘的改變；(4)電鏡觀察：各亞組分別于術(shù)后7d、14d、21d取材后電鏡下觀察神經(jīng)軸突及髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變；(5)

5、神經(jīng)傳導速度的測定：21d亞組麻醉后暴露雙側(cè)坐骨神經(jīng)，記錄復(fù)合肌肉動作電位波幅，潛伏期，計算出運動神經(jīng)傳導速度。 4.統(tǒng)計學處理：所有計量資料均用均數(shù)±標準差表示，計量資料自身前后比較采用配對t檢驗，組間比較采用方差分析法。采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行處理，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1、大鼠及大鼠坐骨神經(jīng)的大體觀察：用藥后7d，A組坐骨神經(jīng)呈銀白色、光滑，與周圍組織無粘連，周圍組織無充血水腫。

6、其余各組均出現(xiàn)不同程度的改變，其中B組光澤度較A組差；D組、E組、F組、C組坐骨神經(jīng)的顏色依次加重，由淺黃色到黃褐色，且均與周圍組織有粘連；G組與B組相似，但粘連較重。14d較7d時均稍有加重，21d時B組、C組、G組較14d時無明顯改變，D組、E組、F組較14d有所加重。 2、A組術(shù)后24h雙后肢活動無障礙；其余各組均出現(xiàn)運動功能障礙，其中B組約36h恢復(fù)，其他組約于術(shù)后72h恢復(fù)運動功能。 3、組織學變化用藥后7d，A組雙側(cè)

7、坐骨神經(jīng)纖維均排列規(guī)則。B組右側(cè)神經(jīng)外膜血管充血，神經(jīng)纖維髓鞘輕度腫脹，少許神經(jīng)纖維髓鞘空泡化；兩側(cè)相似。C組右側(cè)絕大部分神經(jīng)束中的神經(jīng)纖維髓鞘空泡化，軸索消失或變性，炎細胞浸潤，同時伴有灶性出血、壞死，個別神經(jīng)束雪旺氏細胞增生顯著；左側(cè)全部神經(jīng)束的神經(jīng)纖維髓鞘空泡化，其余與右側(cè)相似。D組病理改變與B組相似，程度較重。E組與D組相似，但靠近束膜部有雪旺氏細胞增生。F組與E組相似，程度更重。G組可見炎性細胞浸潤。用藥后14d，A組較前無明

8、顯改變。B組部分神經(jīng)纖維髓鞘腫脹較前加重。C組較7d時，雪旺氏細胞增多，余無明顯改變。D組、E組、F組軸索的變性以及雪旺氏細胞的增生均較前加重，G組神經(jīng)纖維間的炎性反應(yīng)較前明顯減輕，其余無明顯改變。用藥后21d，A、B組大鼠較前無明顯改變。C組較14d時，雪旺氏細胞增生更加明顯。D組、E組、F組雪旺氏細胞較前增多，且隨著酚甘油濃度的增加，雪旺氏細胞增生也更加明顯。G組神經(jīng)纖維間無明顯慢性炎性反應(yīng)。 4、超微結(jié)構(gòu)變化用藥后7d，A

9、組雙側(cè)髓鞘厚薄均勻，形態(tài)規(guī)則，半側(cè)結(jié)構(gòu)排列整齊，線粒體脊和膜分界清晰。B組右側(cè)神經(jīng)髓鞘輕微增生，輕微不整形，板層狀結(jié)構(gòu)模糊不清，線粒體大部分膜和脊界限模糊不清，微絲、微管數(shù)量減少。左側(cè)神經(jīng)髓鞘輕度增生，有分層顯像，其他基本正常。C組左側(cè)髓鞘厚薄不均，形態(tài)不規(guī)則，部分板層結(jié)構(gòu)排列紊亂，有分層現(xiàn)象，板層結(jié)構(gòu)外凸內(nèi)凹，軸索線粒體大部分脊和膜融合，模糊不清，部分線粒體空泡化，微絲、微管數(shù)量減少。右側(cè)與左側(cè)相似。D組與C組變化一致，程度明顯減輕，

10、兩側(cè)相似。E組重于D組。F組重于E組。G組變化與B祖相似。用藥后14d，A、B、C、G組較7d時無明顯改變。D組、E組、F組可見髓鞘的增生，線粒體脊和膜的融合均較前加重。用藥后21d，各組較14d時無明顯改變。 5、神經(jīng)傳導速度用藥后21d，各組神經(jīng)傳導速度和復(fù)合動作電位波幅均明顯低于對照組，但潛伏期明顯高于對照組；阿霉素鞘外組潛伏期明顯短于鞘內(nèi)組及其余各組(P<0.05或0.01)，動作電位波幅明顯高于鞘內(nèi)組及其余各組(P<0.05或

11、0.01)；無水乙醇鞘外組及12％酚甘油鞘外組波幅明顯低于其余各組(P<0.01)，而無水乙醇鞘內(nèi)組及12％酚甘油組的潛伏期明顯長于其余各組(P<0.01)；運動神經(jīng)傳導速度除無水乙醇鞘外組及12％酚甘油鞘外組明顯降低外(P<0.05)，其余各組差異無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：神經(jīng)毀損藥物阿霉素局部刺激性小、對運動功能影響小；無水乙醇、酚甘油局部刺激性較大，酚甘油對神經(jīng)毀損的程度及對運動功能的影響隨濃度增加而加重；慶大霉素對局部組織刺