不同干預(yù)方法對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷導(dǎo)致神經(jīng)病理性疼痛的影響.pdf

1、第一部分 不同慢性神經(jīng)痛模型中c-jun、NGF和鈉通道亞型的表達(dá) 目的:通過(guò)建立兩種不同疼痛模型，觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)即刻早期基因c-jun、NGF和電壓門(mén)控鈉通道亞型Nav1.8、Nav1.9和Nav1.3以及坐骨神經(jīng)中NGF的表達(dá)，探討慢性神經(jīng)痛的發(fā)生機(jī)制。 方法:雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分成3組，制備坐骨神經(jīng)壓迫性損傷(組1，CCI組，n=12)與部分坐骨神經(jīng)損傷(組2，SNI組，n=12)兩種疼

2、痛模型，另一組為假手術(shù)組(組3，n=12)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用組內(nèi)同側(cè)與對(duì)側(cè)自體對(duì)照，于術(shù)前2天和術(shù)后1、3、5、7、9、11、13天測(cè)定機(jī)械痛閾和熱痛閾。分別于術(shù)后1、7和14天取大鼠雙側(cè)L4、L5和L6DRG及雙側(cè)坐骨神經(jīng)，以免疫組織化學(xué)分析CCI大鼠相應(yīng)DRGc-jun、NGF和坐骨神經(jīng)NGF表達(dá)變化。以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)(RT-PCR)半定量分析CCI與SNI后14天大鼠相應(yīng)背根神經(jīng)節(jié)鈉通道Nav1.8、Nav1.9和Nav1.3轉(zhuǎn)錄

3、物的變化。 結(jié)論:CCI模型術(shù)后以熱痛覺(jué)過(guò)敏為主，而SNI模型術(shù)后出現(xiàn)明顯觸誘發(fā)痛；CCI模型術(shù)后DRG中c-jun表達(dá)是神經(jīng)損傷的標(biāo)志和始動(dòng)因素，引起NGF表達(dá)發(fā)生改變，而后又影響到鈉通道表達(dá)，但在SNI模型中出現(xiàn)不同的表達(dá)，提示兩種疼痛模型存在不同的病理生理機(jī)制。 第二部分:鞘內(nèi)注射N(xiāo)av1.8反義寡核苷酸對(duì)慢性神經(jīng)痛大鼠背根神經(jīng)節(jié)鈉通道m(xù)RNA表達(dá)的影響 目的:探討鞘內(nèi)注射(IT)Nav1.8反義寡核苷酸

4、(ASODN)對(duì)慢性坐骨神經(jīng)擠壓損傷(CCI)大鼠背根神經(jīng)節(jié)Nav1.8鈉通道表達(dá)的影響。 方法：雄性SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組：組1(CCI+NS組，n=6)；組2(CCI+錯(cuò)義寡核苷酸MISODN45μg組，n=6)；組3(CCI+ASODN45μg組，n=6);組4(CCI+ASODN90μg組，n=6)。按Bennett法制作CCI模型，以術(shù)前2日和術(shù)后1、3、5、7、9、11、13日為觀察時(shí)點(diǎn)，用vonFreyfil

5、aments測(cè)定機(jī)械觸誘發(fā)痛和熱痛刺激儀測(cè)定熱痛閾，術(shù)后5日鞘內(nèi)置管，術(shù)后8日開(kāi)始鞘內(nèi)注藥，術(shù)后14d取雙側(cè)L4、L5和L6DRG測(cè)定鈉通道Nav1.8mRNA和c-jun的表達(dá)。 結(jié)論：鞘內(nèi)注射N(xiāo)av1.8ASODN對(duì)CCI模型大鼠出現(xiàn)的疼痛行為有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，這種作用部分是通過(guò)下調(diào)背根神經(jīng)節(jié)Nav1.8mRNA鈉通道表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的，其中90μg劑量作用更完全，但Nav1.8ASODN鞘內(nèi)注射沒(méi)有神經(jīng)修復(fù)功能。 第三

6、部分 外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠慢性神經(jīng)痛和背根神經(jīng)節(jié)鈉通道表達(dá)的影響 目的:建立坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCI)模型，觀察外源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)對(duì)慢性神經(jīng)痛和背根神經(jīng)節(jié)(DRG)鈉通道表達(dá)的影響，探討慢性神經(jīng)痛中NGF的作用機(jī)制。 方法:雄性SD大鼠48只，制備CCI模型，而后按給予的藥物與否和劑量不同，分為組1(CCI組)、組2(CCI+NS組)、組3、組4、組5(即刻給予NGF4μg/kg、8μg/kg

7、和16μg/kg)以及組6、組7和組8(CCI術(shù)后4天給予NGF4μg/kg、8μg/kg和16μg/kg)，每組均有6只大鼠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用組內(nèi)同側(cè)與對(duì)側(cè)自體對(duì)照，以術(shù)前2日和術(shù)后1、3、5、7、9、11、13日為觀察時(shí)點(diǎn)，用vonFreyfilaments測(cè)定機(jī)械觸誘發(fā)痛和熱痛刺激儀測(cè)定熱痛閾。以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)(RT-PCR)半定量分析CCI后14天大鼠相應(yīng)背根神經(jīng)節(jié)鈉通道Nav1.8和Nav1.3轉(zhuǎn)錄物mRNA的變化，同時(shí)觀察雙