MAPK、NF-κB、AP-1的表達(dá)水平和惡性腫瘤陰虛證關(guān)系的研究.pdf

1、根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，陰虛證是機(jī)體在致病因素的作用下體內(nèi)發(fā)生的一種基本病理過程和綜合征，在它的發(fā)生和發(fā)展過程中體內(nèi)必然存在和發(fā)生著一系列的級聯(lián)病理生理反應(yīng)。也就是說，陰虛證時體內(nèi)發(fā)生的病理變化是廣泛而全面的，機(jī)體的每個系統(tǒng)、器官、組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和/或功能都發(fā)生了程度不同的改變(原發(fā)性改變和/或繼發(fā)性改變)。 申維璽等<'[1-4]>用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論和方法進(jìn)行研究，在國內(nèi)外首先提出了：陰虛證的本質(zhì)是細(xì)胞因子，其基本發(fā)病學(xué)機(jī)理是由于機(jī)體

2、在各種致病因素的損害作用下，導(dǎo)致細(xì)胞因子基因表達(dá)調(diào)控失調(diào)，白細(xì)胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor；TNF)等炎性細(xì)胞因子的基因表達(dá)增強(qiáng)、生物學(xué)活性相對升高，引起細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂的結(jié)果。 目前的理論研究得出的“陰虛證的本質(zhì)是細(xì)胞因子”只是一個理論模型和理論框架，要研究清楚陰虛證時細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)變化的具體內(nèi)容、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及核轉(zhuǎn)錄因子對陰虛證炎性細(xì)胞因子的調(diào)控等問

3、題，只能是依靠實驗研究才‘能解決。由于陰虛證發(fā)生的復(fù)雜性，以往對其發(fā)病機(jī)制的研究尚無定論，加之國內(nèi)外對陰虛證時信號傳導(dǎo)、核轉(zhuǎn)錄因子對陰虛證炎性細(xì)胞因子的調(diào)控研究甚少，因此我們在應(yīng)用傳統(tǒng)實驗方法的基礎(chǔ)上，需要結(jié)合新的技術(shù)手段來闡述。基因芯片技術(shù)(genechip technology)，又稱cDNA微陣列(cDNA microarray)，是分析瞬間基因表達(dá)全貌的很有價值的工具，它可以剖析基因間相互作用的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)體系。目前有關(guān)基因芯片技術(shù)

4、研究陰虛證發(fā)病學(xué)機(jī)理的報道較少，故應(yīng)用該技術(shù)尋找陰虛證候差異表達(dá)的基因，將有助于闡述陰虛證信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及核轉(zhuǎn)錄因子對陰虛證炎性細(xì)胞因子的調(diào)控機(jī)制，探討陰虛證的發(fā)病學(xué)機(jī)理，并為診斷和治療陰虛證候提供新的策略。為此，對絲裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號傳導(dǎo)通路、核因子(nuclear factor，NF)-<,к>B、激活蛋白(activator protein,AP-1)

5、和惡性腫瘤陰虛證炎性細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控的關(guān)系方面進(jìn)行了以下實驗研究。 實驗研究方法和結(jié)果 一、應(yīng)用免疫組化方法檢測肺癌陰虛證患者肺組織非瘤細(xì)胞MAPK、NF-<,к>B、AP-1蛋白的表達(dá)水平 方法：選取20例肺癌陰虛證患者和120例肺癌無陰虛患者，其中肺癌陰虛證患者男性9例，女性11例，年齡41-70歲；肺癌無陰虛證患者男性10例，女性10例，年齡37-70歲，分為兩組：肺癌陰虛證組和肺癌無陰虛組。以兩組患者手

6、術(shù)后大體肺石蠟包埋組織為材料，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對兩組患者肺組織非瘤細(xì)胞內(nèi)MAPK、NF-<，к>B、AP-1蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測分析，采用X<'2>檢驗對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示肺癌陰虛證患者非瘤細(xì)胞內(nèi)MAPK、NF-<,к>B、AP-1蛋白表達(dá)水平較肺癌無陰虛證患者明顯升高。非瘤細(xì)胞內(nèi)MAPK、NF-<,к>B、AP-1蛋白表達(dá)差異在兩組之問有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 二、應(yīng)用基因表達(dá)譜芯

7、片檢測惡性腫瘤陰虛證患者M(jìn)APK、NF-<,к>B、AP-1基因的表達(dá)水平 方法：選取3例陰虛證患者和3例無陰虛證患者。其中肺癌2例，均為女性，肺癌陰虛證患者64歲，肺癌無陰虛證患者60歲；結(jié)腸癌2例，均為男性，結(jié)腸癌陰虛證患者58歲，結(jié)腸癌無陰虛證患者55歲；胃癌患者2例，均為女性，陰虛證患者61歲，無陰虛證患者58歲。將上述病人總RNA提取后，分別逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。再進(jìn)行測試芯片的雜交、洗染和分析，根據(jù)測試芯片的結(jié)果再雜交表

8、達(dá)譜芯片，芯片采用高分辨率掃描儀(Gene Tech公司)進(jìn)行掃描，將掃描圖像信號轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號，得到他們之間基因表達(dá)的差異信息。 結(jié)果：基因表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示陰虛證患者M(jìn)APK、NF-κB、AP-1基因表達(dá)信號值明顯高于無陰虛證組，兩組間基因表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 綜合分析陰虛證本質(zhì)理論研究結(jié)果和MAPK、NF-κB、AP-1信號傳導(dǎo)通路對炎性細(xì)胞因子的調(diào)控機(jī)制，結(jié)合本實驗的研究結(jié)果，得出以下初步結(jié)論：