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文檔簡介
1、膠原蛋白由于具有良好的生物相容性、弱抗原性和可生物降解性等優(yōu)良特性，而在醫(yī)藥衛(wèi)生等諸多領(lǐng)域有廣泛的應用。本文在本實驗室已成功構(gòu)建的表達類人膠原蛋白的重組畢赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6的基礎(chǔ)上，用響應面分析法(RSM)優(yōu)化了其在搖瓶培養(yǎng)中的發(fā)酵條件。采用Box-Behnken Design(BBD)考察初始誘導pH值、溫度和甲醇添加量三個主要影響因子對產(chǎn)物類人膠原蛋白表達量的影響。響應面分析確定的最優(yōu)因素水平組合為：初始誘
2、導pH值為4.7，溫度28℃，甲醇添加量為2.1％/24h。在此基礎(chǔ)上利用Bioengineering KLF2000，3.7L自控發(fā)酵罐構(gòu)建了畢赤酵母工程菌株的補料-分批發(fā)酵過程菌體的非結(jié)構(gòu)生長模型、產(chǎn)物形成模型、限制性底物甘油和甲醇的消耗模型，為優(yōu)化發(fā)酵工藝控制策略提供理論依據(jù)。 利用離子交換層析和凝膠過濾層析對發(fā)酵產(chǎn)物進行組合分離純化，得到電泳純表達產(chǎn)物，通過紫外光譜和紅外光譜的譜圖分析，表明產(chǎn)物類人膠原蛋白具有與天然膠原
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