膽脂瘤上皮細(xì)胞中腫瘤壞死因子受體1的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的： 繼發(fā)性中耳膽脂瘤是一種慢性炎癥，其病理表現(xiàn)以膽脂瘤上皮細(xì)胞過度增殖、凋亡和鄰近骨質(zhì)的破壞為主要特點(diǎn)。目前，繼發(fā)性中耳膽脂瘤形成的確切機(jī)制尚不清楚，已有研究證實(shí)細(xì)胞因子(cytokine，CK)在中耳膽脂瘤的形成與發(fā)展中有重要作用，不管是膽脂瘤上皮增殖能力改變、骨質(zhì)破壞吸收加劇、角質(zhì)碎屑堆積，還是膽脂瘤染色體異常、膽脂瘤信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)變化都與細(xì)胞因子有直接或間接的聯(lián)系。因此，深入研究細(xì)胞因子在繼發(fā)性中耳膽脂瘤中的具體作用十分重要

2、，是研究清楚繼發(fā)性中耳膽脂瘤的發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵一環(huán)。本研究旨在通過檢測腫瘤壞死因子受體1(tumour necrosisfactor receptor 1，TNFRl)及caspase-8在繼發(fā)性中耳膽脂瘤中的表達(dá)及蛋白含量，核因子-kB(nuclear factor-kB，NF-kB)在繼發(fā)性中耳膽脂瘤中的表達(dá)及活性，從而探討它們?cè)谀懼龉琴|(zhì)破壞機(jī)制中的作用。 方法： 1．采用免疫組化兩步法檢測TNFR1、caspas

3、e-8、增殖細(xì)胞核抗原(proliferation cellnuclear antigen，PCNA)及NF-kB分別在36例繼發(fā)性中耳膽脂瘤上皮、20例繼發(fā)性中耳膽脂瘤患者外耳道皮膚、15例正常無病變外耳道皮膚上皮細(xì)胞中的表達(dá)。 2．采用Western Blot法檢測TNFR1、caspase-8分別在25例繼發(fā)性中耳膽脂瘤上皮、25例繼發(fā)性中耳膽脂瘤患者外耳道皮膚、15例正常無病變外耳道皮膚上皮細(xì)胞中的蛋白表達(dá)。 3

4、．采用TUNEL法檢測16例繼發(fā)性中耳膽脂瘤上皮、10例繼發(fā)性膽脂瘤患者外耳道皮膚、10例正常無病變外耳道皮膚上皮細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞的表達(dá)。 結(jié)果： 1．TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA在中耳膽脂瘤上皮中均有陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率分別為(68.61±5.74)％、(80.14±4.79)％、(50.67±4.44)％及(77.03±4.33)％，其中TNFR1、caspase-8主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，N

5、F-kB及PCNA主要位于細(xì)胞核。在中耳膽脂瘤組織中上述因子主要分布在棘層、顆粒層和基底層細(xì)胞，角質(zhì)層細(xì)胞表達(dá)較弱。而在中耳膽脂瘤患者外耳道皮膚和正常無病變外耳道皮膚中TNFR-1、caspase-8、NF-k B及PCNA陽性細(xì)胞明顯減少，主要分布在棘層和顆粒層細(xì)胞，基底層和角質(zhì)層的細(xì)胞陽性表達(dá)較弱。膽脂瘤組織TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA的表達(dá)高于膽脂瘤患者外耳道皮膚和正常無病變外耳道皮膚(p<0.05)。膽脂

6、瘤患者外耳道皮膚和正常無病變外耳道皮膚TNFR1、caspase-8、NF-kB及PCNA的表達(dá)無差別(p>0.05)。 2．凋亡細(xì)胞在中耳膽脂瘤上皮、中耳膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚中均有陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率分別為(75.67±4.58)％、(30.52±6.93)％及(31.47±6.36)％，在膽脂瘤上皮中，凋亡細(xì)胞存在于棘層、顆粒層和基底層，膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚中凋亡細(xì)胞主要分布在基

7、底層，棘層及顆粒層數(shù)量明顯較少，膽脂瘤上皮細(xì)胞的凋亡率顯著高于膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚，其差異有顯著性意義(p<0.05)，但后兩者的凋亡率無顯著性差異(p>0.05)。 3．膽脂瘤上皮組織及膽脂瘤患者外耳道皮膚組織中均有TNFR1、caspase-8蛋白的表達(dá)，TNFR1蛋白條帶的位置在55KD，caspase-8蛋白條帶的位置在55.3KD，膽脂瘤患者外耳道皮膚組TNFR1蛋白、caspase-8蛋白表達(dá)明

8、顯較膽脂瘤上皮組弱，正常無病變外耳道皮膚無TNFR1、caspase-8蛋白的表達(dá)。 4．中耳膽脂瘤組織中NF-kB與PCNA及caspase-8與細(xì)胞凋亡率之間均有相關(guān)性(p<0.05)。 結(jié)論： 1．中耳膽脂瘤上皮中TNFR1表達(dá)及蛋白含量顯著高于膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚組織，提示其參與了繼發(fā)性中耳膽脂瘤的發(fā)病機(jī)制。 2．中耳膽脂瘤上皮中caspase-8的表達(dá)、蛋白含量及細(xì)胞凋亡率

9、顯著高于膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚組織，提示caspase-8參與了中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞過度凋亡的機(jī)制。 3．中耳膽脂瘤上皮中NF-kB的活性及PCNA的表達(dá)顯著高于膽脂瘤患者外耳道皮膚及正常無病變外耳道皮膚組織，提示NF-kB參與了中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞過度增殖的機(jī)制。 4．TNFR1可能激活了NF-kB及caspase-8兩條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而使膽脂瘤上皮細(xì)胞存在過度增殖及過度凋亡兩種狀態(tài)，大量增殖的細(xì)胞及