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文檔簡介
1、腹瀉既是一種獨立的疾病,又是多種疾病病理進程中的一個癥狀。統(tǒng)計表明,我國每年有8.36億人次患腹瀉,因此衛(wèi)生部把腹瀉列為我國重點防治的疾病之一?,F(xiàn)代醫(yī)學研究表明,腹瀉病因諸多、病機復(fù)雜,其發(fā)病基礎(chǔ)是胃腸道的分泌、消化、吸收和運動等障礙,使分泌量增加,食物不能完全分解,吸收量減少和腸胃蠕動加速等所致。其中,炎癥介質(zhì)是一類致瀉性自體活性物質(zhì),臨床所見的多數(shù)腹瀉性疾病(包括感染性和非感染性)大多是由于致病因子使腸道發(fā)生炎癥,釋放出各種炎癥介質(zhì)
2、造成的。因此,抗腹瀉藥物可通過抗炎,如抑制炎癥的發(fā)生、發(fā)展或炎癥介質(zhì)的合成、釋放,產(chǎn)生止瀉效果。 野罌粟(Papaver nudicaule L.)為罌粟科罌粟屬多年生草本雙子葉植物,用于止瀉在北方各少數(shù)民族中沿用已久,在以往的研究中發(fā)現(xiàn),野罌粟蒴果和全草的水提物具有止瀉作用強,發(fā)揮作用迅速,能迅速緩解甚至消除腹瀉及伴隨癥狀一腹痛,與同類藥物比較在不改變胃腸菌群環(huán)境而發(fā)揮抗腹瀉作用方面具有明顯的優(yōu)勢。因此從現(xiàn)代科學角度深入研究和
3、揭示民族醫(yī)藥的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機理,將對民族醫(yī)藥的研發(fā)、生產(chǎn)和臨床使用產(chǎn)生重要影響。本實驗研究探討野罌粟水煎劑抗腹瀉的作用機理,集中于其對腸上皮細胞的保護作用以及止痛抗炎作用的研究。 研究內(nèi)容包括文獻綜述和實驗研究兩個部分。文獻綜述部分討論了中醫(yī)藥防治急慢性腹瀉的研究概況以及民族醫(yī)藥野罌粟止瀉作用的研究進展。實驗研究部分采用番瀉葉灌胃制造出小鼠腹瀉模型,研究野罌粟水煎劑對腹瀉小鼠的行為學,小鼠小腸的形態(tài)學、病理學方面改變的影響及血
4、清中白細胞介素-1(IL-1β)的含量和組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)的表達,以及細胞問黏附分子-1(ICAM-1)和增殖細胞核抗原(PCNA)的表達及其對腸上皮細胞的影響。實驗研究結(jié)果如下: 1.野罌粟水煎劑對腹瀉小鼠的行為學及小腸黏膜組織病變的影響 小鼠在灌胃番瀉葉的第四天均不同程度的出現(xiàn)明顯的腹瀉,表現(xiàn)為便次增多,便質(zhì)稀軟。到第七天時小鼠呈明顯的消瘦狀態(tài),且皮毛污穢并出現(xiàn)了倦怠乏力,精神萎靡,厭食等癥狀,腹瀉現(xiàn)象
5、也明顯加劇。藥物干預(yù)3天后,各給藥組的小鼠腹瀉癥狀明顯改善,表現(xiàn)為便數(shù)減少,便質(zhì)由稀水樣轉(zhuǎn)為粘稠,精神狀態(tài)良好,飲食正常,情緒稍見興奮,體重增加不明顯。 HE染色,光鏡下觀察:正常小腸組織結(jié)構(gòu)清晰完整,粘膜排列規(guī)則整齊。絨毛上皮吸收細胞胞漿豐富,淡染,胞核位于基部,呈橢圓形,核仁清楚,相鄰細胞頂部有完善的緊密連接。杯狀細胞數(shù)目較少,散在分布。固有層內(nèi)未見淋巴細胞等炎細胞浸潤。腹瀉模型組小腸外觀均有不同程度的粘膜充血、水腫、腸腔變
6、大增粗現(xiàn)象。病理切片顯示,小腸粘膜腫脹,絨毛脫落,失去小腸正常結(jié)構(gòu),上皮細胞水腫,細胞間連接結(jié)構(gòu)出現(xiàn)缺損。杯狀細胞明顯增多,大量淋巴細胞浸潤。各給藥組小鼠腸道組織的充血、水腫情況均有改善。小腸黏膜輕度腫脹,絨毛基本無脫落、結(jié)構(gòu)清晰,少量或無淋巴細胞浸潤。 2.野罌粟水煎劑對腹瀉過程中炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用 胃腸道不僅是消化器官,也是重要的免疫器官。當免疫功能發(fā)生異常時,如過渡免疫應(yīng)答或免疫耐受,將會導(dǎo)致各種胃腸道疾病,可引起
7、機體免疫功能失衡。而TNF-α和IL-1 β是機體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的基本細胞因子,參與機體多種組織細胞的生長分化和功能調(diào)節(jié),在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。炎癥細胞因子水平的升高,可進一步激發(fā)炎癥進程,引起腸黏膜的損傷,出現(xiàn)黏膜充血水腫,甚至糜爛、出血。由于TNF-α和IL-1 β均具有強烈的致炎活性,可直接作用于血管內(nèi)皮細胞,使其通透性增加,導(dǎo)致腸壁大量滲出,故高水平的TNF-α和IL-1 β在一定程度上可反映腸壁通透性增加,并可導(dǎo)致一
8、系列的腹瀉癥狀發(fā)生。 本實驗依據(jù)腹瀉發(fā)生時炎癥反應(yīng)的特點,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫組織化學的方法,通過定量和定性的分析血清和組織中的IL-1 β和TNF-α的水平變化來說明野罌粟水煎劑對腹瀉過程中炎癥反應(yīng)的抑制作用。 實驗結(jié)果顯示,腹瀉模型組小鼠血清中的IL-1 β含量與正常組相比明顯升高;小腸組織切片中的TNF-α陽性表達也顯著增加。而野罌粟各個治療組小鼠血清中的IL-1 β含量較模型組明顯降低;同時TN
9、F-α表達出的棕黃色顆粒較模型組也明顯減少。說明野罌粟能夠抑制腹瀉過程中IL-1 β和TNF-α的表達,減輕腹瀉中的炎癥反應(yīng),改善腹瀉癥狀并減輕腹痛。這可能是野罌粟能有效止瀉的作用機理之一。 3.野罌粟水煎劑對腹瀉小鼠腸上皮細胞的保護作用 白細胞的過度激活是腹瀉病理過程中的一個重要環(huán)節(jié),ICAM-1作為免疫調(diào)節(jié)因子,通過受配體相互作用,介導(dǎo)白細胞不同亞群間的接觸和粘附,調(diào)節(jié)白細胞的功能活性和免疫反應(yīng)。嚴重腹瀉可引起腸粘膜
10、損傷,腸通透性增加,腸屏障功能障礙。而且近年來研究發(fā)現(xiàn),增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)可反映腸粘膜上皮細胞的增殖狀況,對腸粘膜的增殖和修復(fù)有重要的意義。 本實驗用免疫組織化學的方法分別探討野罌粟水煎劑對腹瀉小鼠腸道組織中的ICAM-1和PCNA表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型組的ICAM-1較正常組表達明顯增多。野罌粟各組與模型組比較表達均有減少,以野罌粟高劑量組最為顯
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