野罌粟澀腸止瀉與歸大腸經(jīng)的在體實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 基于野罌粟及其總生物堿(TotalAlkaloidsofPapaverNudicaule，TAPN)具有抗腹瀉型潰瘍性結(jié)腸炎作用的臨床與藥理研究和工作基礎(chǔ)，以傳統(tǒng)醫(yī)藥理論和應(yīng)用背景為參考依據(jù)，利用化學(xué)分離分析技術(shù)，結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，從野罌粟有效成分在大鼠不同臟器組織分布規(guī)律及其對胞內(nèi)第二信使cAMP、cGMP含量影響的角度，探討野罌粟歸大腸經(jīng)的理論的實(shí)驗(yàn)學(xué)依據(jù);同時(shí)通過對大鼠結(jié)腸組織血管活性腸肽(Vaso

2、activeIntestinalPeptide，VIP)含量及其受體mRNA表達(dá)水平的分析，揭示野罌粟抗腹瀉型潰瘍性結(jié)腸炎作用的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用番瀉葉加冰乙酸化學(xué)刺激法，復(fù)制大鼠潰瘍性結(jié)腸炎腹瀉模型;
　　 2.采用醇提堿沉、氯仿萃取野罌粟總堿;
　　 3.應(yīng)用HE染色并在光鏡下觀察各組大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)變化;
　　 4.采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS），

3、定性測定各時(shí)間點(diǎn)不同組織臟器中野罌粟堿分布規(guī)律;
　　 5.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，測定不同組織臟器腺苷酸環(huán)化酶(AdenylateCyclase，AC)、環(huán)磷酸腺苷(cyclicAdenosineMonophosphate，cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷(cyclicGuanosineMonophosphate，cGMP)含量;
　　 6.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)，測定結(jié)腸組織血

4、管活性腸肽(VIP)含量和血管活性腸肽受體mRNA(VasoactiveIntestinalPeptideReceptormRNA,VIPRmRNA)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.與模型組大鼠比較，野罌粟組及洛哌丁胺組大鼠腹瀉指數(shù)顯著下降(P＜0.01)、便潛血程度均轉(zhuǎn)為弱陽性，部分已呈陰性;病理形態(tài)學(xué)顯示大鼠結(jié)腸粘膜上皮完整、排布均勻，腺體排列整齊，僅見少量的炎癥細(xì)胞浸潤;
　　 2.通過對野罌粟組大鼠各組

5、織臟器二級質(zhì)譜檢測，發(fā)現(xiàn)野罌粟治療組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)胃及大腸內(nèi)有野罌粟堿分布;
　　 3.與模型組大鼠比較，野罌粟組大鼠脾、大腸、小腸內(nèi)AC含量顯著上升（P＜0.01或P＜0.05）、心內(nèi)AC含量顯著下降(P＜0.01);胃內(nèi)cAMP含量顯著上升(P＜0.05)、大腸內(nèi)cAMP含量顯著下降(P＜0.01);大腸、腦內(nèi)cGMP含量顯著上升（P＜0.01或P＜0.05）、肺內(nèi)cGMP含量顯著下降(P＜0.01);大腸內(nèi)cAMP/cGM

6、P比值顯著下降(P＜0.01);肝內(nèi)AC含量與cAMP含量之間呈顯著相關(guān)性(P＜0.01或P＜0.05);
　　 4.與模型組大鼠比較，野罌粟組大鼠結(jié)腸組織內(nèi)VIP含量顯著下降(P＜0.01)、VIPR1mRNA表達(dá)量顯著下降(P＜0.01)、VIPR2mRNA表達(dá)量也呈下降趨勢，但統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.野罌粟總堿可有效降低腹瀉大鼠腹瀉指數(shù)及便血程度，能明顯改善大鼠腹瀉

7、癥狀;
　　 2.野罌粟總堿可促進(jìn)腹瀉大鼠受損結(jié)腸組織修復(fù)，恢復(fù)其功能;
　　 3.野罌粟總堿作用后，可在腹瀉大鼠胃、大腸內(nèi)檢測到野罌粟堿的分布;
　　 4.野罌粟總堿可使腹瀉大鼠胃、肺、大腸、腦內(nèi)環(huán)核苷酸含量或其比值產(chǎn)生顯著性變化;
　　 5.野罌粟總堿可使腹瀉大鼠結(jié)腸組織內(nèi)VIP含量下降，同時(shí)能夠下調(diào)腹瀉大鼠結(jié)腸組織內(nèi)VIPR1mRNA表達(dá)量。
　　 6.從野罌粟堿在大鼠大腸內(nèi)的分布、大鼠結(jié)腸