野生黃花苜蓿SKIP同源基因cDNA的克隆與分析.pdf

1、本研究對野生黃花苜蓿(Medicago falcata L.)中SKIP同源基因的cDNA片段進(jìn)行了克隆和分析。利用含20％ PEG6000的1/2倍MS液體培養(yǎng)基作為脅迫液，模擬干旱逆境對野生黃花苜蓿幼苗進(jìn)行脅迫處理。以上述脅迫處理的黃花苜蓿幼葉總RNA為模板，用RT-PCR和同源克隆法，擴(kuò)增得到野生黃花苜?？鼓嫦嚓P(guān)剪切因子MfSKIP基因的cDNA。通過對MfSKIP基因cDNA進(jìn)行克隆和序列的分析，結(jié)果表明MfSKIP基因cDNA

2、長2256 bp，包含一個1836 bp完整的開放閱讀框，編碼611個氨基酸，分子量約為69.1 kDa，理論等電點8.78。將克隆得到的MfSKIP基因cDNA進(jìn)行核苷酸BLAST，發(fā)現(xiàn)與蒺藜苜蓿SKIP同源基因(登錄號XM_003594499.2)同源性達(dá)到96％。對MfSKIP蛋白氨基酸序列分析表明，在序列的188-347位存在一個以S-N-W-K-N多肽為標(biāo)簽的SNW SKIP結(jié)構(gòu)域，而此結(jié)構(gòu)為SKIP蛋白家族特有且高度保守的結(jié)

3、構(gòu)域。將MfSKIP氨基酸序列進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)預(yù)測、磷酸化位點分析、親/疏水性分析、信號肽預(yù)測、亞細(xì)胞定位預(yù)測、跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測等相關(guān)生物信息學(xué)分析，結(jié)果表明該蛋白屬于定位在細(xì)胞核的不含跨膜結(jié)構(gòu)域且不含信號肽的親水性蛋白，二級結(jié)構(gòu)主要由無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)組成。構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)，野生黃花苜蓿SKIP蛋白與蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)親緣關(guān)系較近。此外，進(jìn)一步克隆了基因組中MfSKIP