黃連木LEAFY同源基因cDNA全長的克隆與載體構(gòu)建.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得畝喵要喬垮或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：刎鵲鴰簽字日期：弘，p年口鈿，，日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完叁了解分鍛灰獸有關(guān)保留、使用學(xué)

2、位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)旬訊衣矽以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：立。)扦靜簽字日期：砂f2年D易月日學(xué)位論文作者畢業(yè)去向：工作單位：通訊地址：導(dǎo)師張繡確簽字日期：戶，二年口釤月／z日電話：郵編：黃連木LEAFY同源基因cDNA全長的克隆與

3、載體構(gòu)建l152bp的完整開放閱讀框，編碼383個氨基酸，該序列與其它植物已克隆的LFY基因序列高度同源。其核苷酸序列與同屬于漆樹科的卡亡果￡Fy基因的同源性高達(dá)94％，與龍眼、蓖麻、胡桃的同源性分別為84％、82％和78％；其編碼氨基酸序列的同源性與卡亡果、麻風(fēng)樹、龍眼、蓖麻分別為95％、85％、84％和84％。推測PcBLFY基因可能為竹垌源基因。2通過對黃連木雄株、雌株的花蕾中分離到的PcBLFY基因序列進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)，兩種不同性別

4、來源的PcBLFY基因在第52位、394位和l105位表現(xiàn)出單核苷酸的多態(tài)性，其中雄株在這三個位點的堿基分別為G，A，A和C，T，G，分別編碼Val，lle，Thr和Leu，Leu，Ala；雌株在該位點的堿基則為C，T，A，編碼Leu，Leu，Thr，雌雄間單核苷酸的改變導(dǎo)致在該位點的氨基酸的改變。3植物表達(dá)載體的構(gòu)建：選擇酶切位點BglII和凰匠II，將PcBLFy基因的編碼序列插入到植物表達(dá)載體pCAMBIAl3051中，通過PCR

5、鑒定及測序檢測，得到重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌工程菌AGLl中。4原核表達(dá)載體的構(gòu)建：將PcBLFY基因的編碼序列通過酶切位點NdeI和HindlII插入到原核表達(dá)載體pET28a中，成功構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體，并通hIEcoliBL21(DE3)實現(xiàn)了PcBLFy基因在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高效重組表達(dá)，同時利用Ni2柱親和層析法對重組蛋白進(jìn)行了分離純化，得到較高純度的目標(biāo)蛋白。本研究成功地從童期較長的黃連木植物中分離克隆到￡Fy全