兔VX2食管移植瘤模型的建立及食管局部靶向給藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.采用組織塊移植法建立兔VX2食管移植瘤模型，通過(guò)食管鋇餐造影、CT掃描及組織病理學(xué)檢查，探討食管移植瘤的成瘤率、生長(zhǎng)特性及轉(zhuǎn)移情況，為食管癌的基礎(chǔ)研究及尋找有效治療方法奠定基礎(chǔ)；2.采用特制的食管靶向給藥裝置，觀(guān)察局部應(yīng)用化療藥對(duì)正常食管的損傷以及應(yīng)用細(xì)胞保護(hù)劑-氨磷汀對(duì)化療藥引起食管損傷的保護(hù)作用，為減輕氨磷汀的副反應(yīng)，降低患者的費(fèi)用尋找新的給藥途徑，并為臨床開(kāi)展食管癌局部靶向治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：1.兔V

2、X2食管移植瘤模型的建立：12只新西蘭大白兔由白求恩國(guó)際和平醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，月齡3～4月，雌雄不限，體重2.5～4kg。兔VX2瘤苗由第四軍醫(yī)大學(xué)附屬唐都醫(yī)院張洪新教授提供。麻醉荷瘤VX2細(xì)胞株的新西蘭大白兔，從兔大腿荷瘤處取出腫瘤組織，生理鹽水漂洗3次，用眼科剪將腫瘤剪碎至1mm3左右的組織塊備用。麻醉成功后，將兔仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒，切開(kāi)上腹部，剝離兔腹段食管，在賁門(mén)上約3cm處逐層切開(kāi)食管漿膜層及肌層，將制備好的

3、腫瘤塊植入食管粘膜下層，縫合食管肌層及外膜，關(guān)腹，術(shù)后肌注青霉素40萬(wàn)IU/只，連續(xù)3天。每日觀(guān)察大白兔生活習(xí)性、精神狀態(tài)及體重增減等情況。于接種后第7、14及21天進(jìn)行鋇餐造影和CT掃描檢查，觀(guān)察腫瘤的生長(zhǎng)情況。接種后21天，處死兔子取標(biāo)本行病理學(xué)檢測(cè)。2.食管局部靶向給藥的實(shí)驗(yàn)研究：自制食管靶向給藥裝置，其由上、下球囊，骨架導(dǎo)管及進(jìn)水管道等組成。將該裝置插入食管后，膨脹上、下球囊，在上、下球囊之間形成一個(gè)腔隙，然后向腔隙內(nèi)灌注DDP

4、和（或）氨磷汀藥液。24只新西蘭大白兔隨機(jī)分為對(duì)照組、單純DDP組和氨磷汀+DDP治療組，每組8只。對(duì)照組：食管腔隙局部灌注生理鹽水，作用50mm；單純DDP組：給藥前食管腔隙局部先灌注生理鹽水，預(yù)處理20 min，然后吸出生理鹽水再灌注0.25mg/ml DDP藥液，作用30min；聯(lián)合組：給藥前食管腔隙局部先灌注0.8mg/ml氨磷汀藥液，預(yù)處理20min，然后吸出氨磷汀藥液，再灌注0.25mg/ml DDP藥液，作用30min。于

5、給藥后第6天處死兔子取標(biāo)本行病理學(xué)檢測(cè)。
　　 結(jié)果：1.兔食管移植瘤模型的建立：1.1一般情況：12只兔子除2只死于手術(shù)并發(fā)癥（胃穿孔及誤縫食管所致的梗阻）外，其余10只接種后7天，進(jìn)食水及精神可，體重?zé)o明顯下降，14天后兔體重開(kāi)始下降，每天下降2～3％，至第21天，兔子明顯消瘦，體重下降15～20％，食管造影及CT掃描示食管下段腫瘤占位，成瘤率100％。處死動(dòng)物可見(jiàn)腫瘤位于食管下段，環(huán)繞食管生長(zhǎng)，穿破膈肌侵入胸腔，大小為21

6、.04±10.35cm3（9.88cm3～40.53cm3），其中2只兔子有大量胸腔積液，8只腫瘤周?chē)?jiàn)多枚腫大淋巴結(jié)，3只肺表面有轉(zhuǎn)移性癌結(jié)節(jié)。切開(kāi)腫瘤及食管見(jiàn)腫瘤呈灰白色魚(yú)肉狀，已穿破食管壁，呈蕈傘型生長(zhǎng)，腫瘤表面糜爛，4只兔子在腫瘤上形成瘺道，出現(xiàn)穿孔。腫瘤組織病理學(xué)檢查符合低分化鱗狀細(xì)胞癌。1.2食管造影情況：腫瘤接種7天后，食管造影未見(jiàn)異常；14天后，食管造影示食管下段管壁僵硬，一側(cè)有輕微壓跡，長(zhǎng)度為1.51±0.46cm（0

7、.9cm～2.3cm）；21天時(shí)食管下段粘膜破壞，充盈缺損明顯，長(zhǎng)度為3.90±0.5.5cm（3.2 cm～4.8 cm），伴有狹窄，4只出現(xiàn)食管穿孔。1.3食管CT掃描：接種7天后，CT掃描示兔食管下段管壁無(wú)增厚，管徑約5mm；14天見(jiàn)食管下段走行區(qū)局限性管壁增厚，管腔狹窄，管徑增粗，最大徑為1.04±0.27cm（0.7cm～1.5cm）；21天時(shí)接種區(qū)食管腫瘤增大，最大徑為2.28±0.34cm（1.7cm～218cm），其中5

8、例伴有少量至中等量胸腔積液。2.食管粘膜損傷情況：肉眼觀(guān)，單純DDP組灌注部位食管明顯增粗、水腫，切開(kāi)食管見(jiàn)粘膜表面有灰白色“偽膜”覆蓋，粘膜糜爛、充血。聯(lián)合用藥組灌注部位食管輕度增粗，無(wú)“偽膜”形成，粘膜表面光滑或輕度充血。光鏡下，單純DDP組食管粘膜上皮大部或全部脫落，粘膜層水腫，粘膜下血管擴(kuò)張充血，固有層、粘膜下層有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，侵及中深肌層，炎細(xì)胞以中性粒細(xì)胞為主。聯(lián)合用藥組，食管粘膜上皮部分脫落，固有層、粘膜下層有中量炎細(xì)胞

9、浸潤(rùn)，肌層少見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 結(jié)論：1.采用組織塊移植法建立兔VX2食管癌模型具有周期短，成瘤率高，生長(zhǎng)迅速等特點(diǎn)，其生物學(xué)特性與人類(lèi)食管癌相似，為食管癌的基礎(chǔ)研究及尋找有效治療方法提供較為理想的動(dòng)物模型。2.自行研制的用藥裝置可實(shí)現(xiàn)食管的局部靶向給藥，具有局部藥物濃度高，用藥量小，全身副作用輕等特點(diǎn)，為臨床開(kāi)展食管癌局部靶向治療提供了理論依據(jù)。3.食管局部灌注DDP對(duì)食管粘膜有明顯損傷，而化療前局部給予細(xì)胞保護(hù)劑-氨磷汀可