1-溴丙烷亞急性吸入染毒對大鼠大腦NR2B和GluR2的影響.pdf

1、目的:初步探討1-溴丙烷(1-bromopropane，1-BP)對大鼠大腦離子型谷氨酸受體NR2B亞基和GluR2亞基的影響，以探索1-BP的神經(jīng)毒性作用機制。
　　 方法:
　　 1.建立1-BP亞急性吸入染毒模型成年、雄性無特定病原體(specific pathogen-free，SPF)級Wistar大鼠48只，隨機分為對照組、低濃度組、中濃度組和高濃度組4組，采用動式吸入染毒方式分別給與新鮮空氣、設(shè)計濃度為12

2、50 mg/m3、2500 mg/m3和5000 mg/m3的1-BP氣體（8小時/天，5天/周，連續(xù)4周），每天采樣并檢測染毒柜中1-BP的實際染毒濃度。每天觀察實驗動物的一般情況及行為表現(xiàn)，3天稱量一次大鼠的體重。實驗結(jié)束后處死大鼠，分離大腦、心臟和肝臟等臟器進行相關(guān)指標的檢測。
　　 2.每組取3只大鼠采用免疫熒光技術(shù)觀察各組大鼠大腦中NR2B和GluR2的分布情況。
　　 3.每組取9只大鼠分別應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡(w

3、estern blot，WB)法和實時熒光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qPCR)法測定各組大鼠大腦NR2B和GluR2的蛋白和基因表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.1-BP亞急性吸入染毒模型
　　 (1)1-BP實際染毒濃度的檢測結(jié)果為:
　　 ①低濃度組:1285.00(1198.50，1429.

4、50) mg/m3;
　　 ②中濃度組:2554.00(2423.25，2735.25) mg/m3;
　　 ③高濃度組:5270.00(4994.00，5408.00)mg/m3。
　　 (2)實驗動物的一般情況染毒1周后，中和高濃度組大鼠逐漸出現(xiàn)食欲減退、活動減少的表現(xiàn);染毒3周后高濃度組大鼠出現(xiàn)后肢肌力明顯下降、毛色暗淡污穢;低濃度組大鼠出現(xiàn)上述異常表現(xiàn)的時間晚于中、高濃度組，且癥狀較輕微;對照組大鼠無上述

5、異常表現(xiàn)。全部大鼠在染毒期間無死亡發(fā)生。
　　 (3)大鼠的體重增長情況:實驗動物體重的增長依次為:對照組＞低濃度組＞中濃度組＞高濃度組。
　　 ①中濃度組:染毒的第6天、第9天及第18天至染毒結(jié)束，其體重均低于對照組（P＜0.05或P＜0.01）;實驗的第29天，其體重也低于低濃度組(P＜0.05)。
　　 ②高濃度組:染毒的第6天，其體重低于對照組（P＜0.01）和低濃度組(P＜0.01);自染毒的第9天到染

6、毒結(jié)束，其體重均低于其他3組動物的體重（P＜0.01）。
　　 2.1-BP亞急性吸入染毒大鼠大腦中NR2B和GluR2蛋白的分布免疫熒光顯示NR2B和GluR2蛋白在低、中和高濃度組大鼠的大腦皮質(zhì)中均有表達，表達部位與對照組相比無明顯差異，NR2B和GluR2蛋白的陽性表達部位較為一致。
　　 3.1-BP亞急性吸入染毒對大鼠大腦NR2B和GluR2蛋白表達的影響
　　 (1)中濃度組和高濃度組大鼠大腦NR2B

7、蛋白的表達水平均高于對照組(P＜0.05)，低濃度組大鼠大腦NR2B蛋白的表達水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2)中濃度組和高濃度組大鼠大腦GluR2的蛋白表達水平均高于對照組(P＜0.01和P＜0.05)，低濃度組大鼠大腦GluR2蛋白的表達水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.1-BP亞急性吸入染毒對大鼠大腦中NR2B mRNA和GluR2 mRNA表達水平的影響<

8、br>　　 (1)低、中和高濃度組大鼠大腦中NR2B的mRNA表達水平與對照組大鼠相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (2)低、中和高濃度組大鼠大腦中GluR2的mRNA表達水平與對照組大鼠相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.在本實驗條件下，1-BP染毒組大鼠大腦皮質(zhì)中均有NR2B和GluR2分布表達且兩者的表達部位較為一致。
　　 2.一定濃度的1-BP亞急性