蝎毒對(duì)鋰-匹羅卡品癲癇大鼠抗癇作用及其GluR2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:(1)比較性研究蝎毒(scorpion venom,SV)與丙戊酸(valproic acid,VPA)在氯化鋰-匹羅卡品癲癇(Lithium-PilocarpineSeizures,LPS)慢性點(diǎn)燃大鼠模型的抗癲癇作用；(2)觀察SV對(duì)LPS大鼠在慢性自發(fā)性發(fā)作期(14d～28d)GluR2在海馬CA1、CA3、齒狀回(Demme Gyrus,DG)區(qū)的表達(dá),以探索SV對(duì)LPS大鼠海馬GluR2表達(dá)的影響及SV可能的抗癲癇作用機(jī)

2、制。
　　 方法:(1)106只清潔級(jí)健康成年雄性Spague-Dawley(SD)大鼠,100只用于制作鋰-匹羅卡品癲癇大鼠模型,6只作為正常對(duì)照組(n=6)。造模后大鼠隨機(jī)分為L(zhǎng)PS模型組(n=40)、VPA干預(yù)組(n=20)、SV干預(yù)組(n=40)。各組均采用灌胃給予干預(yù)藥物,正常對(duì)照組、LPS模型組給予蒸餾水,VPA干預(yù)組給予丙戊酸(120mg·kg-1·d-1),SV干預(yù)組給予蝎毒(0.3mg·kg-1·d-1)；(2

3、)造模后各組大鼠隨機(jī)選取20只干預(yù)28天并進(jìn)行行為學(xué)觀察,記錄14d～28d自發(fā)性發(fā)作的發(fā)作次數(shù)、發(fā)作級(jí)別,采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；(3)剩余LPS模型組和SV干預(yù)組各20只根據(jù)干預(yù)天數(shù)隨機(jī)分為1d,3d,7d,14d,28d五個(gè)亞組(n=4),采用免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定正常對(duì)照組及各亞組大鼠海馬CA1、CA3、DG區(qū)GluR2的表達(dá),通過(guò)圖像分析技術(shù)定量分析其動(dòng)態(tài)變化和組間差異,采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:(1)正常對(duì)

4、照組觀察期無(wú)癇性發(fā)作,LPS組急性期均有Ⅳ級(jí)以上癇性發(fā)作。SE后大鼠進(jìn)入靜默期(7d～14d),之后模型組大鼠進(jìn)入慢性癲癇自發(fā)性發(fā)作期(14d～28d),表現(xiàn)為癲癇的自發(fā)反復(fù)發(fā)作(spontaneous recurrent seizure,SRS)；(2)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組SRS的發(fā)作次數(shù)及發(fā)作級(jí)別比較,SV干預(yù)組與模型組比較,SV能顯著控制LPS大鼠的SRS的發(fā)作次數(shù)和降低發(fā)作級(jí)別(P<0.05)；(3)GluR2在正常對(duì)照組大鼠海馬CA1、

5、CA3區(qū)錐體細(xì)胞層及DG區(qū)顆粒細(xì)胞層均有明顯表達(dá),可見(jiàn)較多GluR2-IR陽(yáng)性細(xì)胞；(4)LPS模型組大鼠海馬各區(qū)的GluR2表達(dá)均明顯下調(diào),并隨時(shí)間延長(zhǎng)其下調(diào)愈加顯著。在各觀察時(shí)間點(diǎn)上與正常對(duì)照組相比較,差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(5)SV干預(yù)組與LPS模型組比較:在海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)觀察到在1d時(shí)間點(diǎn)上兩組的GluR2表達(dá)接近,其后各點(diǎn)GluR2顯著上調(diào),3d達(dá)峰值,3d后各觀察時(shí)間點(diǎn)其表達(dá)處于峰值后平穩(wěn)期,1d后各

6、觀察時(shí)間點(diǎn)與LPS模型組比較有顯著差異(P<0.05)；而在海馬DG區(qū)的GluR2表達(dá)兩組有類似趨勢(shì),但較CA1區(qū)和CA3區(qū)的時(shí)間有延遲,且下降趨勢(shì)持續(xù)時(shí)間更短。第3d的時(shí)間點(diǎn)上兩組的GluR2表達(dá)值幾乎重疊,7d后差別逐漸明顯,LPS模型組繼續(xù)下降到第14天最低,以后第28d時(shí)表達(dá)與14d相近；(6)SV干預(yù)組與正常對(duì)照組比較,各觀察時(shí)間點(diǎn)GluR2表達(dá)弱于正常對(duì)照組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)

7、SV在LPS模型中有顯著抗癲癇作用,能減少大鼠癇性發(fā)作頻率,降低發(fā)作級(jí)別；(2)SV抗癲癇作用與VPA干預(yù)后這一作用比較,無(wú)論在減弱發(fā)作級(jí)別和減少發(fā)作次數(shù)上,在本實(shí)驗(yàn)所使用SV干預(yù)劑量情況下弱于VPA；(3)LPS癲癇模型鼠在各觀察時(shí)間點(diǎn)上GluR2表達(dá)均較正常對(duì)照組明顯下降。GluR2表達(dá)下降不論是癲癇發(fā)作的因?yàn)檫€是結(jié)果,提示都可能是癲癇發(fā)作相關(guān)的一個(gè)重要的機(jī)制或途徑；(4)SV干預(yù)組大鼠的癲癇發(fā)作得到有效控制,其海馬各區(qū)GluR2表