鉤藤堿對缺血-缺氧大鼠海馬區(qū)星形膠質細胞EAAT2和NR2B mRNA表達的影響.pdf

1、目的：
　　觀察在缺血缺氧條件下，海馬區(qū)星形膠質細胞谷氨酸轉運體EAAT2和NR2BmRNA的表達，和鉤藤堿干預后EAAT2和NR2BmRNA表達的變化，從而探討鉤藤堿對細胞缺血缺氧后EAAT2和NR2B基因表達的作用。
　　方法：
　　取新生SD大鼠(72h內)海馬組織進行星形膠質細胞原代培養(yǎng)，取第4代膠質細胞進行細胞爬片后行GFAP熒光免疫鑒定，陽性率達90％-95%以上細胞可用于后續(xù)實驗。將實驗分為空白對照組、缺

2、血缺氧組、鉤藤堿低劑量組（0.02mg/ml）、鉤藤堿高劑量組（0.2mg/ml）。通過使用含連二亞硫酸鈉的Earle’s平衡鹽溶液的化學方法制作體外細胞缺血缺氧模型，通過提取各組總RNA，進行實時熒光定量PCR檢測各組星形膠質細胞谷氨酸轉運體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達。
　　結果：
　　1、細胞經原代培養(yǎng)7-9天后細胞密度基本可達80%-90%,且以星形膠質細胞為主。傳代的星形膠質細胞有較強

3、的折光性，其形態(tài)不規(guī)則，胞體較大而扁平、胞漿豐富，胞核位于胞體一邊；2、缺血缺氧組及鉤藤堿組星形膠質細胞谷氨酸轉運體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達較空白對照組明顯升高；3、鉤藤堿低劑量組較缺血缺氧組星形膠質細胞谷氨酸轉運體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的表達下調不明顯，鉤藤堿高劑量組較缺血缺氧組、鉤藤堿低劑量組星形膠質細胞谷氨酸轉運體EAAT2和NMDA受體2B亞型（NR2B）mRNA的