轉(zhuǎn)運(yùn)體miRSNP與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及化療反應(yīng)相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分轉(zhuǎn)運(yùn)體基因3’-UTR上的SNP與人結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及化療反應(yīng)相關(guān)性研究
　　【目的】探討轉(zhuǎn)運(yùn)體基因3’-UTR上的SNP與人結(jié)直腸癌發(fā)生、臨床病理參數(shù)、化療副反應(yīng)及化療療效的相關(guān)性。
　　【方法】首先，篩選轉(zhuǎn)運(yùn)體基因上的 SNP位點(diǎn)，并設(shè)計(jì)等位基因特異性引物；其次，收集175例結(jié)直腸癌患者和300例健康人的外周血，從中提取DNA；然后，采用等位基因特異性擴(kuò)增法測(cè)定轉(zhuǎn)運(yùn)體基因上的 SNP基因型；最后，用統(tǒng)計(jì)軟件分析S

2、NP基因型與人結(jié)直腸發(fā)生、臨床病理參數(shù)及化療反應(yīng)的相關(guān)性。
　　【結(jié)果】（1）研究了6個(gè)位于轉(zhuǎn)運(yùn)體基因3’-UTR上的SNP位點(diǎn)基因型與結(jié)直腸癌發(fā)生的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs3742106、rs63282661和rs1059751的等位基因及基因型分布頻率在結(jié)直腸癌患者和健康人群中存在顯著差異(P＜0.05)。其中，rs3742106與結(jié)直腸癌的相關(guān)性最為顯著；與 GG基因型相比，TT基因型（OR=0.434,95%CI=0.215

3、-0.875）、TG基因型（OR=0.589,95% CI=0.387-0.895）和T等位基因攜帶者（OR=0.614,95% CI=0.451-0.836）患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)均更低。此外，病例組中T等位基因頻率也顯著低于對(duì)照組中T等位基因頻率（24.84%vs34.98%;P=0.002），提示T等位基因可能對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)生起到保護(hù)作用。rs562、rs3177514和rs2458225的等位基因及基因型分布頻率在結(jié)直腸癌和正常人群中

4、的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）臨床病理參數(shù)相關(guān)性分析結(jié)果表明，rs1059751位點(diǎn)基因型與患者腫瘤浸潤(rùn)深度相關(guān)，其CT基因型在T3+T4患者中的頻率顯著低于TT型，提示CT基因型可能不利于腫瘤浸潤(rùn)，起到保護(hù)機(jī)體的作用。rs2458225的基因型與腫瘤大小相關(guān)，其 CT基因型患者的腫瘤似乎比TT型患者的小，也可能起到保護(hù)作用。（3）與5-FU化療反應(yīng)相關(guān)性分析結(jié)果表明，除了rs3742106的基因型與化療副反應(yīng)的發(fā)生幾近相關(guān)（P=0.069

5、）之外，其余SNP位點(diǎn)的基因型與結(jié)直腸癌化療副反應(yīng)及療效之間均無(wú)明顯相關(guān)性。
　　【結(jié)論】ABCC4基因3’-UTR上的SNP位點(diǎn)rs3742106與人結(jié)直腸癌的發(fā)生顯著相關(guān)，其T等位基因可能對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生起到保護(hù)作用。
　　第二部分 ABCC4基因3’-UTR上的SNP rs3742106對(duì)miRNA調(diào)控作用的影響
　　【目的】研究ABCC4基因3’-UTR上的SNP位點(diǎn) rs3742106對(duì)miRNA調(diào)控作用的影響

6、。
　　【方法】首先，構(gòu)建ABCC4基因上miR-105、miR-3148和miR-3190-5p作用靶點(diǎn)序列的兩種基因型（GG和TT）熒光素酶表達(dá)載體；其次，將構(gòu)建好的載體和miRNA共同轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，并用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)測(cè)定基因活性；最后，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析SNP位點(diǎn)rs3742106對(duì)miRNA調(diào)控作用的影響。
　　【結(jié)果】（1）與對(duì)照組熒光素酶活性相比，miR-105、miR-3148和miR-3190-5p分別

7、能顯著抑制TT、GG和GG型重組熒光素酶的活性（P<0.05）。（2）比較兩種不同基因型重組熒光素酶的活性發(fā)現(xiàn)，miR-3148（P=0.022）和miR-3190-5p（P=0.024）組存在顯著差異，而miR-105的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.23），提示SNP位點(diǎn)rs3742106對(duì)miR-3148和miR-3190-5p抑制ABCC4基因表達(dá)的作用存在影響。
　　【結(jié)論】 SNP位點(diǎn)rs3742106通過(guò)影響miR-314