MUC2與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究.pdf

1、東南大學(xué)博士學(xué)位論文MUC2與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究姓名：卜曉東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：黃培林20111014東南大學(xué)博士學(xué)位論文和遷移能力的變化。7建立裸鼠移植瘤模型，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株裸鼠體內(nèi)成瘤情況，移植瘤組織HE染色，觀察腫瘤組織形態(tài)，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)移植瘤組織中MUC2、Ki67和MMP9蛋白表達(dá)水平的變化?！?采用一定濃度和作用時(shí)間的Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT處理靶細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR和west鋤bl

2、ot技術(shù)檢測(cè)Hesl、Maml、MUC21Tl】剛A和蛋白表達(dá)水平的變化。9MTr實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、T啪swell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT對(duì)靶細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。l結(jié)果l1免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，NMC組中MuC2蛋白表達(dá)水平最低(4615％)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，在HPLGDHGDNMC序列中，呈現(xiàn)MUC2蛋白表達(dá)的順序下降(產(chǎn)一O73436，POo001)，而結(jié)直腸癌組織中，MC組和SRCC組的MUC

3、2蛋白表達(dá)水平明顯高于NMc組(PO05)。2Meta分析顯示，MuC2蛋白在結(jié)直腸黏液腺癌中的陽性率明顯高于非黏液腺癌((1m，210；95％CI，130—340；盧O002)，而遠(yuǎn)端結(jié)直腸癌中MUC2蛋白的陽性率明顯低于近端結(jié)直腸癌(RR，O74；95％CI，O64一O85；盧0ooO)。T3&T4期結(jié)直腸癌患者中MUC2蛋白表達(dá)略高于Tl＆T2期，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)并無明顯差異(RR，117；95％CI，100137產(chǎn)0052)。MUC

4、2蛋白表達(dá)陽性率在低分化坩高中分化組、Nl&N2＆N3坩No組、MlⅧMo組中均未見明顯差異。3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，四株結(jié)直腸癌細(xì)胞中，Caco2的MUC2mRNA表達(dá)量最低，HT29、LoVo和Lsl74T中Muc2mRNA的表達(dá)水平分別是Caco2的1560士772、6812士370、7558士2690倍。四種結(jié)直腸癌細(xì)胞株中，LSl74T細(xì)胞的MUC2mRNA表達(dá)量最高，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用LSl74T作為靶細(xì)胞，進(jìn)行I塒A

5、i。4經(jīng)過測(cè)序比對(duì)，各重組克隆中插入片段序列與設(shè)計(jì)的oligo序列完全一致，因此四個(gè)干擾載體構(gòu)建成功。構(gòu)建成功的各干擾質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染LSl74T細(xì)胞后，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，pcDNATM62GW／EmGFPmiR2干擾載體的基因沉默效果最佳，因此選用該質(zhì)粒建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。5實(shí)時(shí)定量PcR和westemblot結(jié)果顯示，pcDNA62Gw／EmGFPmiR2干擾載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LSl74T細(xì)胞后，下調(diào)了LSl74T細(xì)胞內(nèi)MUC2