脂多糖體外刺激對未成熟星形膠質細胞氧化損傷的機制研究.pdf

1、腦白質損傷是早產兒腦損傷的主要類型。其病理特點主要是反應性星形膠質細胞膠質化、小膠質細胞浸潤、少突膠質細胞損傷和髓鞘損害及軸突損傷等。流行病學研究表明，宮內感染在早產兒腦白質損傷的發(fā)生機制中起了重要的作用。宮內感染導致腦白質損傷，其不僅僅是少突膠質細胞損傷的過程，星形膠質細胞在疾病的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮了重要的作用。星形膠質細胞氧化損傷在腦白質損傷的發(fā)生機制中可能有重要作用，但感染/炎癥是否導致未成熟星形膠質細胞的氧化損傷及其機制尚不清楚。

2、因此，本研究通過星形膠質細胞培養(yǎng)，研究脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）體外刺激對未成熟星形膠質細胞的氧化損傷影響，以及星形膠質細胞培養(yǎng)液細胞因子巨噬細胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)是否參與這一過程。而且予茶多酚(TP-EGCG)干預，探討TP-EGCG對LPS體外刺激后未成熟星形膠質細胞氧化損傷的保護作用;以及星形膠質細胞培養(yǎng)液細胞因子MIP-1β是否參與這一過程，為將來腦白質損傷的防治提供理論依據(jù)。
　　

3、目的:
　　研究LPS體外刺激后未成熟星形膠質細胞的總超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量及細胞因子MIP-1β水平的變化，探討LPS體外刺激對未成熟星形膠質細胞的氧化損傷作用，以及這一作用是否有細胞因子MIP-1β參與;另外通過予TP-EGCG干預后檢測星形膠質細胞總SOD活力、MDA含量、凋亡細胞數(shù)與總細胞數(shù)的百分比及細胞因子MIP-1β等水平的變化，探討TP-EGCG是否對LPS體外刺激后星形膠質細胞氧化損傷有

4、保護作用。
　　方法:
　　1.星形膠質細胞培養(yǎng):不同濃度LPS（5μg/mL、10μg/mL）分別刺激不同時間（1天、3天、7天）后，比色法檢測星形膠質細胞培養(yǎng)液總SOD活力和MDA含量變化，觀察星形膠質細胞氧化損傷情況。ELISA法檢測星形膠質細胞培養(yǎng)液細胞因子MIP-1β的濃度變化。
　　2.TP-EGCG干預:以LPS（5μg/mL）刺激3天，同時予TP-EGCG干預后，比色法檢測星形膠質細胞培養(yǎng)液總SOD活力

5、和MDA含量變化，觀察星形膠質細胞氧化損傷情況;以LPS（5μg/mL）刺激1天、3天，通過TUNEL法檢測凋亡細胞數(shù)與總細胞數(shù)百分比的變化，觀察細胞凋亡情況;ELISA法檢測星形膠質細胞培養(yǎng)液細胞因子MIP-1β的濃度變化。
　　結果:
　　1.LPS（5μg/mL、10μg/mL）分別刺激1天、3天、7天時星形膠質細胞培養(yǎng)液總SOD活力較對照組差異均無顯著意義(P＞0.05)。LPS（5μg/mL）刺激3天時星形膠質細胞

6、培養(yǎng)液MDA含量較對照組明顯增加(p＜0.05);LPS(10mg/mL)刺激1天、3天、7天及LPS（5μg/mL）刺激1天、7天時MDA含量較對照組差異均無顯著意義(P＞0.05)。LPS（5μg/mL）刺激1天和7天、LPS（10μg/mL）刺激1天和3天星形膠質細胞培養(yǎng)液MIP-1β濃度明顯降低(P＜0.05);LPS（5μg/mL）刺激3天、LPS(10μg/mL)刺激7天星形膠質細胞培養(yǎng)液MIP-1β濃度較對照組差異無顯著意

7、義(P＞0.05)。
　　2.予TP-EGCG干預后刺激3天星形膠質細胞培養(yǎng)液總SOD活力與LPS組及對照組比較明顯減少，差異具有顯著意義(P＜0.05)。予TP-EGCG干預后刺激3天星形膠質細胞培養(yǎng)液MDA含量較LPS組比較明顯減少(P＜0.05)，但與對照組比較差異不明顯(P＞0.05)。刺激1天時LPS組、LPS+EGCG組與TP-EGCG組之間相比較，星形膠質細胞凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)百分比差異無顯著意義(P＞0.05)，

8、其與對照組比較差異也無顯著意義(P＞0.05);LPS刺激3天時星形膠質細胞凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)百分比較對照組明顯增加，差異具有顯著意義(P＜0.05)，且予TP-EGCG干預后星形膠質細胞凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)百分比較LPS組明顯減少，差異具有顯著意義(P＜0.05)，TP-EGCG刺激3天與對照組比較，星形膠質細胞凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)百分比明顯減少，差異具有顯著意義(P＜0.05)。予TP-EGCG干預后刺激3天及單用TP-EGCG刺