內毒素脂多糖對牛卵母細胞體外成熟的影響及作用機制研究.pdf

1、內毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)能夠抑制機體促性腺激素、類固醇激素的合成與分泌，破壞子宮內膜的正常生理機能以及降低早期胚胎的著床率。但是，關于LPS對卵巢周期性節(jié)律變化，尤其是對卵母細胞成熟潛能的影響研究較少。因此，本試驗旨在研究LPS對牛卵母細胞體外成熟的影響及其可能的作用機制。研究結果如下:
　　1、研究了卵丘-卵母細胞復合體(cumulus-oocyte complexes，COCs)對LPS刺激

2、的免疫應答。結果顯示:(1)將不同濃度的LPS(0、1或10μg/mL)添加至牛卵母細胞體外成熟液中發(fā)現，10μg/mL LPS處理造成卵母細胞第一極體排出率顯著下降，因此本研究選取10μg/mL作為后續(xù)試驗的LPS處理濃度;(2)與對照組相比，LPS處理顯著提高了COCs中細胞膜受體TLR4基因和TLR4蛋白的表達水平(P＜0.05);(3) LPS處理顯著上調了COCs中免疫應答胞內重要傳遞蛋白p-p38 MAPK和NF-κB的表達

3、水平(P＜0.05);(4) LPS處理后，體外成熟液中細胞炎性分子IL-1β，TNF-α和IL-6的濃度均顯著高于對照組(P＜0.05)。
　　2、研究了LPS對卵母細胞體外成熟和孤雌激活后早期胚胎發(fā)育的影響。結果顯示:(1)與對照組相比，LPS處理對卵丘細胞擴展無顯著影響，但皮質顆粒(cortical granule，CG)在皮質區(qū)分布的卵母細胞比例顯著降低(P＜0.05);(2) LPS處理組卵母細胞內ROS水平顯著升高(P

4、＜0.05)，抗氧化相關基因（Trx、Trx2及Prx1）的表達水平顯著下降(P＜0.05);(3) LPS處理組發(fā)生早期凋亡的卵母細胞比例和胞質中細胞色素C的釋放水平均顯著高于對照組(P＜0.05);(4) LPS處理顯著降低了孤雌激活胚胎的卵裂率（73.3±1.76％ vs.82.3±0.88％，n=230）、桑椹胚率（30.7±0.88％ vs.47.3±2.40％）以及囊胚率（14.8±1.96％ vs.34.2±0.8％）(P

5、＜0.05)，而囊胚中凋亡細胞比例顯著增加(P＜0.05)。
　　3、研究了LPS影響卵母細胞體外成熟的可能作用機制。結果顯示:(1)與對照組相比，LPS處理顯著抑制了卵母細胞減數分裂進程，阻滯在MI期的卵母細胞比例顯著增加(P＜0.05);(2)LPS處理組紡錘體異常的卵母細胞比例(12.40±0.95％，n=138)顯著高于對照組(4.87±0.29％，n=129)(P＜0.05)，卵母細胞內紡錘體組裝重要調控蛋白p-MAPK

6、異常分布比例顯著增加， p-MAPK蛋白的表達水平顯著下調(P＜0.05);(3) LPS處理顯著增加了MI期卵母細胞內DHE和ROS水平;(4)與對照組相比，LPS處理顯著提高了發(fā)生早期凋亡的MI期卵母細胞比例，卵母細胞中促凋亡相關基因(caspase-3和Bax)與促凋亡蛋白caspase-3的表達顯著上調(P＜0.05)，而抗凋亡相關基因(Bcl-2和XIAP)的表達顯著下調(P＜0.05);(5) LPS處理改變了卵母細胞內全基