內(nèi)毒素脂多糖對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、內(nèi)毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)能夠抑制機(jī)體促性腺激素、類固醇激素的合成與分泌，破壞子宮內(nèi)膜的正常生理機(jī)能以及降低早期胚胎的著床率。但是，關(guān)于LPS對(duì)卵巢周期性節(jié)律變化，尤其是對(duì)卵母細(xì)胞成熟潛能的影響研究較少。因此，本試驗(yàn)旨在研究LPS對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響及其可能的作用機(jī)制。研究結(jié)果如下:
　　1、研究了卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(cumulus-oocyte complexes，COCs)對(duì)LPS刺激

2、的免疫應(yīng)答。結(jié)果顯示:(1)將不同濃度的LPS(0、1或10μg/mL)添加至牛卵母細(xì)胞體外成熟液中發(fā)現(xiàn)，10μg/mL LPS處理造成卵母細(xì)胞第一極體排出率顯著下降，因此本研究選取10μg/mL作為后續(xù)試驗(yàn)的LPS處理濃度;(2)與對(duì)照組相比，LPS處理顯著提高了COCs中細(xì)胞膜受體TLR4基因和TLR4蛋白的表達(dá)水平(P＜0.05);(3) LPS處理顯著上調(diào)了COCs中免疫應(yīng)答胞內(nèi)重要傳遞蛋白p-p38 MAPK和NF-κB的表達(dá)

3、水平(P＜0.05);(4) LPS處理后，體外成熟液中細(xì)胞炎性分子IL-1β，TNF-α和IL-6的濃度均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　2、研究了LPS對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟和孤雌激活后早期胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果顯示:(1)與對(duì)照組相比，LPS處理對(duì)卵丘細(xì)胞擴(kuò)展無(wú)顯著影響，但皮質(zhì)顆粒(cortical granule，CG)在皮質(zhì)區(qū)分布的卵母細(xì)胞比例顯著降低(P＜0.05);(2) LPS處理組卵母細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高(P

4、＜0.05)，抗氧化相關(guān)基因（Trx、Trx2及Prx1）的表達(dá)水平顯著下降(P＜0.05);(3) LPS處理組發(fā)生早期凋亡的卵母細(xì)胞比例和胞質(zhì)中細(xì)胞色素C的釋放水平均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);(4) LPS處理顯著降低了孤雌激活胚胎的卵裂率（73.3±1.76％ vs.82.3±0.88％，n=230）、桑椹胚率（30.7±0.88％ vs.47.3±2.40％）以及囊胚率（14.8±1.96％ vs.34.2±0.8％）(P

5、＜0.05)，而囊胚中凋亡細(xì)胞比例顯著增加(P＜0.05)。
　　3、研究了LPS影響卵母細(xì)胞體外成熟的可能作用機(jī)制。結(jié)果顯示:(1)與對(duì)照組相比，LPS處理顯著抑制了卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程，阻滯在MI期的卵母細(xì)胞比例顯著增加(P＜0.05);(2)LPS處理組紡錘體異常的卵母細(xì)胞比例(12.40±0.95％，n=138)顯著高于對(duì)照組(4.87±0.29％，n=129)(P＜0.05)，卵母細(xì)胞內(nèi)紡錘體組裝重要調(diào)控蛋白p-MAPK

6、異常分布比例顯著增加， p-MAPK蛋白的表達(dá)水平顯著下調(diào)(P＜0.05);(3) LPS處理顯著增加了MI期卵母細(xì)胞內(nèi)DHE和ROS水平;(4)與對(duì)照組相比，LPS處理顯著提高了發(fā)生早期凋亡的MI期卵母細(xì)胞比例，卵母細(xì)胞中促凋亡相關(guān)基因(caspase-3和Bax)與促凋亡蛋白caspase-3的表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.05)，而抗凋亡相關(guān)基因(Bcl-2和XIAP)的表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05);(5) LPS處理改變了卵母細(xì)胞內(nèi)全基