番茄斑萎病毒屬病毒粒體在寄主植物中的裝配與運(yùn)動(dòng)機(jī)制研究.pdf

1、番茄斑萎病毒屬病毒（tospoviruses）是全球范圍內(nèi)廣泛分布、引起多種作物病害的具有經(jīng)濟(jì)重要性的病毒。本研究選擇病毒粒體裝配與運(yùn)動(dòng)兩個(gè)致病的重要環(huán)節(jié)，綜合應(yīng)用改進(jìn)的負(fù)染色制樣、超薄切片、免疫膠體金標(biāo)記、高壓冷凍電鏡制樣的方法，對(duì)自然感染tospoviruses及人工接種番茄斑萎病毒（TSWV）、番茄環(huán)紋斑點(diǎn)病毒（TZSV）的寄主植株樣品中病毒粒體的裝配與運(yùn)動(dòng)機(jī)制開展了較為系統(tǒng)的研究。
　　發(fā)現(xiàn)tospoviruses侵染寄主

2、細(xì)胞中都誘導(dǎo)產(chǎn)生特殊囊泡。囊泡的形態(tài)主要有環(huán)形、球形、管狀、出芽型和有尾型5種，大小從50nm至1000nm不等，80％以上為300nm至600nm。部分囊泡中包含有未成熟及成熟的病毒粒體。這是首次發(fā)現(xiàn)負(fù)單鏈RNA植物病毒誘導(dǎo)寄主細(xì)胞產(chǎn)生囊泡。
　　發(fā)現(xiàn)tospovriuses侵染的寄主植物細(xì)胞中病毒粒體的裝配發(fā)生于4個(gè)部位：高爾基復(fù)合體平行膜及囊泡內(nèi)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜系統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和囊泡內(nèi)，病毒原質(zhì)（VP）內(nèi)，絲狀內(nèi)含體（FI）內(nèi)。病毒

3、粒體裝配成熟后，其聚集形式有單顆粒（SPA）、雙顆粒（DPA）、三顆粒（TPA）和多個(gè)顆粒（MPA）4種聚集方式，多聚集于囊泡中。
　　發(fā)現(xiàn)tospoviruses病毒粒體在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)有3種方式：
　　1）單個(gè)病毒粒體沿著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜運(yùn)動(dòng)；
　　2）包裹病毒粒體的囊泡沿著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜運(yùn)動(dòng)；
　　3）包裹病毒顆粒的囊泡與其他囊泡協(xié)同作用在細(xì)胞液泡中從一端運(yùn)動(dòng)到另一端并向細(xì)胞壁附近聚集。
　　發(fā)現(xiàn)TSWV、TZSV的運(yùn)

4、動(dòng)相關(guān)蛋白NSm、致病相關(guān)蛋白NSs、糖蛋白Gn3種蛋白均可定位于細(xì)胞壁上，結(jié)合常規(guī)超薄切片和高壓冷凍電鏡制樣觀察，推測(cè)tospoviruses在寄主細(xì)胞間的運(yùn)動(dòng)可能是一種新的植物病毒運(yùn)動(dòng)途徑，即由囊泡攜帶病毒穿過(guò)細(xì)胞壁到達(dá)相鄰的細(xì)胞。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)負(fù)單鏈RNA植物病毒tospoviruses侵染寄主植物誘導(dǎo)產(chǎn)生特殊囊泡，這些囊泡對(duì)病毒粒體在寄主細(xì)胞中的裝配、成熟和聚集起到調(diào)節(jié)作用，在病毒粒體的細(xì)胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)中起重要作用，