HPV高低?；蛐透腥緦m頸組織的比較蛋白質(zhì)組學分析及其差異.pdf

1、第一部分 目的：研究HPV感染宮頸組織后蛋白質(zhì)組表達情況，初步探討高、低?；蛐透腥緦m頸組織后表達的差異，并對差異的蛋白點通過質(zhì)譜分析其意義。 方法：首先采用測序法及l(fā)uminex法對42例臨床HPV感染的標本進行高、低?；蚍中?，分成HPV高危基因型感染宮頸組織的CIN組，低?；蛐透腥緦m頸組織的CA組，每組篩選出3例標本，打成混合池，與正常對照3例標本混合池進行雙向凝膠電泳，比較之間的差異，選取差異大的蛋白點

2、，進行MALDI-TOF質(zhì)譜分析。 結(jié)果： 1.對HPV感染陽性的31例女性泌尿生殖道尖銳濕疣和11例宮頸CIN組織標本，通過測序法和luminex法分型的結(jié)果為：(1)尖銳濕疣標本(無論長在什么部位)或CIN Ⅰ標本，其HPV感染的基因型均為6、11等低危型，測序表現(xiàn)出的是單一峰型，而宮頸CIN Ⅱ～Ⅲ，其HPV感染的基因型均為16、18、33、58等高危型或高危型的混合感染，測序表現(xiàn)出的是單峰或雜峰；(2)外陰和宮頸

3、同時患有尖銳濕疣的標本，其HPV感染的基因型是一致的。 2.將每組篩選的3例標本打成混合池，并對宮頸尖銳濕疣、宮頸CIN及對照宮頸上皮組織蛋白質(zhì)組圖譜進行兩兩比較，HPV低危基因型感染的宮頸尖銳濕疣組織標本與正常宮頸組織標本相比有63個蛋白質(zhì)點有顯著差異，其差異倍數(shù)最大的為20.2939，宮頸尖銳濕疣組表達上調(diào)的蛋白點有51個，下調(diào)的有12個蛋白點；HPV高危基因型感染的宮頸CIN組織標本與正常宮頸組織標本相比有47個蛋白質(zhì)點有

4、顯著差異，宮頸CIN表達上調(diào)的蛋白點有21個，下調(diào)的有26個蛋白點，上調(diào)倍數(shù)最大的為11.2506倍，下調(diào)倍數(shù)最大的為9.00021倍。HPV高?；蛐透腥镜膶m頸CIN組織標本與低危基因型感染的宮頸尖銳濕疣組織標本相比有39個蛋白質(zhì)點有顯著差異，宮頸CIN組較宮頸濕疣組表達上調(diào)的蛋白點有15個，下調(diào)的有24個蛋白點，上調(diào)倍數(shù)最大的為4.24857倍，下調(diào)倍數(shù)最大的為3.37334倍。 3.對3組26個差異蛋白質(zhì)點進行分析，獲得了

5、22張肽質(zhì)量指紋圖，軟件識別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫，搜索后得到匹配的有18個蛋白質(zhì)點，并通過查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫，獲得初步鑒定的18個蛋白質(zhì)的功能信息。它們主要與細胞代謝、信號傳導、細胞分泌、細胞骨架構(gòu)建及細胞增值、分化與凋亡等相關。結(jié)論本實驗采用雙向凝膠電泳技術得到了HPV高、低?；蛐透腥緦m頸組織和正常宮頸上皮組織的蛋白組表達圖譜，并找到兩者之間的差異蛋白點。通過質(zhì)譜分析及生物信息學技術鑒定了部分差異蛋白，其中一些可能與宮頸腫

6、瘤發(fā)生發(fā)展密切相關。為HPV感染宮頸組織的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的建立提供了有意義的資料。這些蛋白點能否作為診斷的標記物和治療的靶標，值得進一步研究。 第二部分 目的：探討HPV高、低?；蛐透腥緦m頸組織標本比較蛋白質(zhì)組學，找出差異的蛋白質(zhì)點，鑒定與宮頸CA或?qū)m頸CIN發(fā)病相關的靶蛋白。 方法：應用雙向凝膠電泳(2-DE)、質(zhì)譜分析和生物信息學等技術進行HPV高、低?；蛐透腥救梭w組織后2-DE圖譜的差異比較，找出差異的蛋

7、白點，通過質(zhì)譜分析，得到PMF圖，再由Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫，找到相應蛋白點的功能信息，分析其表達改變的意義。 結(jié)果：通過對CIN組、CA組分別和正常宮頸組織、CIN組和CA組兩兩比較，每組分別找到了47、63、39個差異蛋白點，共選26個差異倍數(shù)較大的蛋白點進行分析，獲得了22張肽質(zhì)量指紋圖，軟件識別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫，搜索后匹配到18個蛋白點，通過查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫，獲得初步鑒定的18個蛋白質(zhì)的功