宮頸癌差異蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法建立宮頸癌組織及其癌旁非癌宮頸組織的差異蛋白表達譜。旨在尋找與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的蛋白質(zhì)。 方法： 1.選取因?qū)m頸癌行宮頸癌根治術(shù)患者的宮頸癌組織和配對癌旁非癌宮頸組織10例； 2.18cm、pH3-10非線性的IPG膠條進行第一相等電聚焦，12％的SDS-PAGE進行第二向電泳分離，電泳后的凝膠用銀染進行染色； 3.用ImageMaster5.0分析軟件對電泳結(jié)果進行數(shù)據(jù)采

2、集和圖像分析，建立宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質(zhì)組差異表達圖譜： 4.分別篩選宮頸癌組織和癌旁非癌宮頸組織中全蛋白質(zhì)組中產(chǎn)生穩(wěn)定、明顯差異并經(jīng)單例蛋白凝膠和混合蛋白凝膠比對證實的蛋白質(zhì)斑點進行采集，并用特異性的胰蛋白酶消化蛋白質(zhì)； 5.酶解后的肽段采用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(MALDT-TOF-MS)質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析； 6.根據(jù)MALDT-TOF-MS肽指紋圖譜搜索www.matrixscie

3、nce.com上的NCBInr.物種human，固定修飾：Carbamidomethyl(C)?？勺冃揎桮ln-pyro-Glu(N-termQ)，Oxidation(M)。峰值誤差允許范圍100ppm。 7.用Westernblot法檢測PKC，ZNF217在宮頸癌及癌旁非癌宮頸組織中的表達與否及表達量的差異性。 結(jié)果： 1.建立宮頸癌和癌旁非癌宮頸組織的蛋白質(zhì)差異表達圖譜； 2.兩者差異點為56個，其

4、中只在宮頸癌中表達的點9個，只在癌旁非癌宮頸組織中表達的點6個，3倍以上量差的差異點41個，其中在宮頸癌組織中表達上調(diào)大于3倍的蛋白質(zhì)點有16個點(P＜0.05)，在宮頸癌組織中表達下調(diào)大于3倍的蛋白質(zhì)點有25個(P＜0.05)； 3.在56個差異表達的蛋白點中，31個蛋白點通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定； 4.對PKC，ZNF217蛋白的分析發(fā)現(xiàn)，PKC蛋白僅在宮頸癌組織中表達，癌旁非癌宮頸組織中PKC蛋白

5、未見表達，ZNF217在宮頸癌中的表達量多于正常組織。 結(jié)論： 1.運用雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的方法可以高通量、高分辨率、高靈敏的分離、分析宮頸癌組織中差異表達的蛋白質(zhì)： 2.篩選到的56個差異表達蛋白質(zhì)可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)： 3.PKC和ZNF217蛋白可能在宮頸癌中的發(fā)生發(fā)展起關(guān)鍵作用，但其具體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制及促瘤途徑仍待進一步研究。 4.試驗結(jié)果為宮頸癌的診斷、藥物研究、預(yù)后評估帶