高脂蛋白(a)冠心病人內(nèi)皮祖細(xì)胞功能及miRs表達(dá)分析.pdf

1、目的：前期體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脂蛋白（a）[LP(a)]損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）的生物學(xué)功能，EPCs經(jīng)一定濃度的LP(a)處理后，其存活、遷移、粘附、成血管樣結(jié)構(gòu)、克隆形成等均受到損傷，尤其在300mg/mL這個(gè)濃度，在此濃度之下， LP(a)對EPCs上述生物學(xué)功能的損傷作用最為顯著，具有明顯的濃度效用。高LP(a)血癥被認(rèn)為是動脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，但高 LP(a)血癥對病人[HLPCAD]EPCs功能的監(jiān)測尚無報(bào)道，據(jù)上述

2、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果，高LP(a)血癥對病人EPCs很可能存在功能障礙，因此開展高LP(a)血癥對病人EPCs功能分析十分必要。本研究擬從臨床收集高 LP(a)冠心病人[HLPCAD]和低 LP(a)冠心病人[LLPCAD]心內(nèi)科冠心病人血液，分離其循環(huán)EPCs，體外測定分析其EPCs功能，為高LP(a)血癥冠心病人的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。由于miRs對EPCs功能起重要調(diào)控作用，本研究擬分析HLPCAD和LLPCAD的EPCs表達(dá)譜差異，找出

3、促進(jìn)/抑制EPCs功能的miRs，找到一些內(nèi)源性調(diào)控EPCs功能小分子。
　　方法：經(jīng)篩查，獲得在年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙、血壓、血糖、血脂[LP(a)除外]、肌酸酐、尿酸、腎小球的濾過功能比率、藥物使用等方面無顯著差異的心內(nèi)科冠心病人[高LP(a)冠心病人23例，低LP(a)冠心病人27例]，靜脈采血5mL/次，差速貼壁法分離EPCs，經(jīng)免疫熒光和ac-LDL-DiI吞噬及l(fā)ectin結(jié)合鑒定得到CD34+/AC133+/VE

4、GFR-2 EPCs并計(jì)數(shù)。MTT法檢測EPCs存活與增殖，改良Boyden小室測遷移，明膠玻片法測粘附，雜交瘤皿上觀察并計(jì)數(shù)單個(gè)細(xì)胞克隆數(shù)， matrix基質(zhì)膠上測管狀結(jié)構(gòu)形成長度。提取總 RNA，參照說明書使用miRNeasy mini kit(QIAGEN)分析miRs表達(dá)譜。
　　結(jié)果：HLPCAD病人循環(huán) EPCs數(shù)顯著低于 LLPCAD病人（109.4±13.89 vs 384.0±37.07，P=0.002

5、3）；MTT分析結(jié)果表明，LLPCAD組OD值為0.77±0.057，而HLPCAD OD值為0.23±0.045（P=0.0018），表明HLPCAD病人EPCs的生存狀態(tài)較差，這一點(diǎn)在凋亡檢測中進(jìn)一步得到體現(xiàn)，HLPCAD EPCs凋亡水平顯著高于LLPCAD組（4.1±0.81 vs14.9±3.31，P=0.035）。HLPCAD病人和LLPCAD病人的EPCs在粘附（25.3±4.63 vs78.6±6.88, P=0.003

6、0）、遷移（22.0±2.65 vs56.0±4.93, P=0.0037）、（2.4±0.41 vs11.0±1.37，P=0.0003）、管狀結(jié)構(gòu)形成（7.4±1.24 vs33.3±2.62，P=0.0001）均顯著受損。芯片結(jié)果顯示與EPCs相關(guān)的miRs表達(dá)變化（大于1.5倍），高HLPCAD組EPCs miR-126表達(dá)下降近10倍，miR-221/222升高2.3倍，但有趣的是miR-34a不升反降約4倍，然而就EPCs上

7、miR-34a的表達(dá)量而言，尚與miR-126有較大差距（1265.5 vs430.5），熒光定量PCR檢測EPC miR-126表達(dá)結(jié)果顯示 HLPCAD組 EPCs miR-126表達(dá)水平顯著低于低LLPCAD（125.0±22.07 vs25.8±6.49，P=0.0125，n=3）。
　　結(jié)論：①高Lp(a)冠心病人EPCs功能顯著受損。與低Lp(a)冠心病人EPCs相比。其EPCs存活粘附、遷移、克隆形成能力和血管樣結(jié)構(gòu)