微小RNA-27b過表達對殘粒脂蛋白誘導的小鼠內皮祖細胞衰老的影響.pdf

1、內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是血管內皮細胞的前體細胞，有保持血管內皮細胞完整和維持正常血管內皮功能的作用。EPCs的衰老和數量減少與冠心病等缺血性心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。p16INK4α是調控干/祖細胞衰老的重要轉錄因子。餐后高甘油三酯血癥患者血漿中的殘粒脂蛋白（remnant-likeparticles，RLPs）能夠誘導人外周血來源的EPCs衰老，劑量依賴性地上調p16I

2、NK4α的蛋白水平。微小RNA(microRNA，miRNA/miR)是一類高度保守的、由18～22個核苷酸構成的非編碼單鏈RNA，在轉錄后水平負向調控靶基因的表達。已知人RLPs可促進小鼠EPCs的衰老，伴miR-27b表達顯著下調。由此推測miR-27b可能參與調控RLPs誘導的小鼠EPCs衰老。
　　目的：用miR-27b模擬物(mimic)轉染小鼠骨髓來源EPCs，觀察miR-27b過表達對RLPs誘導的EPCs衰老過程的

3、影響。
　　方法：密度梯度離心法提取小鼠雙下肢骨髓單個核細胞，4天后棄去未貼壁細胞。用EBM-2完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至第7天后，將細胞分為miR-27b過表達組和對照組，分別轉染miR-27b mimic及其對照物，24h后用0.2mg/mL的RLPs同時干預兩組細胞。24h后行衰老相關-β-半乳糖苷酶(senescense associated-β-galactosidase，SA-β-Gal)染色、分別計數兩組衰老細胞百分率;提取總

4、RNA，測定兩組細胞中miR-27b、衰老相關基因p16INK4α的mRNA水平。
　　結果：成功分離培養(yǎng)出小鼠骨髓源性EPCs，使miR-27b在EPCs中表達水平顯著上調37倍。miR-27b過表達組的衰老細胞百分率為29.4％，對照組為21.4％。miR-27b過表達組的衰老相關基因p16INK4α的mRNA水平低于對照組，但無統(tǒng)計學顯著性。
　　結論：miR-27b過表達可能對RLPs誘導的小鼠骨髓源性EPCs衰老起