結(jié)締組織生長因子誘導(dǎo)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究.pdf

1、目的：目前實(shí)驗(yàn)研究表明，病理性瘢痕的形成可能是成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞(MyoF)轉(zhuǎn)分化，并且后者持續(xù)存在的結(jié)果。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)被認(rèn)為是促進(jìn)纖維化發(fā)展的最重要的生長因子，具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞分化的作用，但阻斷其表達(dá)而帶來的負(fù)作用也異常明顯，結(jié)締組織生長因子(CTGF)于1991年發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是TGF-β1的下游效應(yīng)因子，主要在間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，是一種特異性更強(qiáng)的促纖維化因子，本文旨在探討結(jié)締組織生長因子是否也具有促進(jìn)瘢痕

2、成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用，且與TGF-β1之間的關(guān)系如何，為增生性瘢痕(HS)的防治研究拓展新的領(lǐng)域。 方法：原代培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(HSF)，分別向其培養(yǎng)基內(nèi)單獨(dú)或同時加入不同濃度的TGF-β1和CTGF，通過CTGF反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染，以及先轉(zhuǎn)染后再加入TGF-β1刺激，使用倒置顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)、Western-blot、流式細(xì)胞術(shù)等方法對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞形態(tài)及表型的轉(zhuǎn)變進(jìn)行評估。

3、 結(jié)果：不同濃度CTGF及TGF-β1作用48h后，各濃度組HSF細(xì)胞形態(tài)均呈現(xiàn)出不同程度的改變，其中以CTGF和TGF-β1聯(lián)合刺激組最為明顯；首先，細(xì)胞排列紊亂，不再具有一定的方向性；其次，形態(tài)不規(guī)則細(xì)胞增多，胞體肥大，呈多極性，胞核表面呈鋸齒狀；第三，α-SMA免疫細(xì)胞化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞增多。 Western-blot結(jié)果顯示，對照組HSF表達(dá)少量α-SMA，不同濃度CTGF及TGF-β1作用于HSF后都能使α-S

4、MA表達(dá)增加(P＜0.05)，且呈一定的濃度依賴性變化，當(dāng)CTGF濃度為7.5ng/ml，TGF-β1濃度為10ng/ml時，α-SMA表達(dá)最強(qiáng)，且隨著濃度升高，α-SMA蛋白表達(dá)逐漸趨于穩(wěn)定，二者聯(lián)合刺激組更為明顯，而CTGFASODN轉(zhuǎn)染組α-SMA表達(dá)與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，CTGFASODN轉(zhuǎn)染后TGF-β1再刺激組與TGF-β1單獨(dú)刺激組相比較，差異顯著(P＜0.05)。 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，當(dāng)加入C

5、TGF和TGF-β1刺激后，流式細(xì)胞儀均檢測出α-SMA染色陽性的細(xì)胞，對照組α-SMA陽性細(xì)胞百分率為10.76±2.81％，CTGF刺激組和TGF-β1刺激組α-SMA陽性細(xì)胞百分率分別為29.13±4.01％和28.74±4.75％，二者聯(lián)合刺激組為43.38±4.89％，而CTGFASODN轉(zhuǎn)染組以及CTGFASODN轉(zhuǎn)染后TGF-β1再刺激組α-SMA陽性細(xì)胞百分率分別為10.66±2.29％和14.29±2.92％。