VEGF、HIF-1α和MMP-9在尖銳濕疣組織中的表達及其與血管生成的關系.pdf

1、尖銳濕疣(condyloma acuminatum,CA)是由人類乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染引起的一種常見的性傳播疾病(sexually transmitted disease,STD),發(fā)病率居性傳播疾病第二位,并逐年升高.HPV是一種嗜上皮細胞的DNA病毒,廣泛感染皮膚、生殖道、呼吸道、消化道上皮組織,與人類多種良惡性腫瘤密切相關.CA臨床多表現(xiàn)為生殖器部位菜花狀或乳頭狀增生物,雖是一種良性增

2、生性疾病,但具有增生快、傳染性強、易于復發(fā)的特點,部分有轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的可能.不僅嚴重影響患者身心健康,而且對社會和家庭造成極大危害. 新生血管的生成與腫瘤關系密切已得到眾多研究證實,在實體腫瘤中,如果沒有微血管的發(fā)生,腫瘤僅可通過擴散緩慢生長到1～2mm<'3>,只有在新生血管形成以后,腫瘤才能迅速長大.CA是HPV病毒感染引起的良性增生物,其發(fā)生發(fā)展可能與血管生成關系密切,研究血管生成與CA的關系將具有重要的意義.判斷血管生

3、成的可靠指標是測量微血管密度(microvessel density,MVD),CD34是血管內(nèi)皮細胞的特異性標志物,用以顯示腫瘤間質(zhì)的微血管.血管生成是各種細胞因子共同作用的結果.血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前已知的最強有力的血管生成因子,它直接作用于血管內(nèi)皮細胞,刺激內(nèi)皮細胞的分裂和增殖,誘導腫瘤血管生成.缺氧誘導因子-1(haypoxia-inducible

4、factor-1,HIF-1)是腫瘤缺氧狀態(tài)下血管生成的核心調(diào)控因子,通過影響其他血管生長因子的表達,而參與血管生成的全過程.血管形成的另一重要步驟是降解細胞外基質(zhì),基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprotemase,MMP)是具有降解細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)功能的一組鋅依賴性內(nèi)切酶,MMP-9在調(diào)節(jié)ECM的代謝、影響新生血管的形成過程中作用尤為突出. 目前HIF-1α、MMP-

5、9在腫瘤組織中的作用研究較多,但HIF-1α、MMP-9與CA中MVD的關系國內(nèi)外尚未見報道,HIF-1α、MMP-9與VEGF在CA組織中的相互關系也未見報道.本研究應用免疫組化SP法檢測35例CA組織和15例正常人包皮組織中VEGF、HIF-1α、MMP-9及CD34的表達,并探討它們在CA血管生成中的可能作用及相互關系. 材料與方法 1.材料 CA標本35例,取材于鄭州大學第一附屬醫(yī)院皮膚性病科,其中男23

6、例,女12例;年齡19～62歲,平均30.8歲;病程20～140天,平均52.6天.臨床表現(xiàn)典型,病理診斷明確,原位雜交證實為HPV感染,符合CA臨床實驗室診斷標準.另取15例經(jīng)組織病理學證實的泌尿外科手術切除正常成年男性包皮組織作為對照組. 2.方法 應用免疫組化SP法對CA組織和正常人包皮組織中VEGF、HIF-1α、MMP-9蛋白的表達進行檢測,抗CD34單克隆抗體標記MVD.HIF-1α、MMP-9和VEGF表達

7、綜合染色強度和陽性細胞占總細胞數(shù)的百分比進行半定量處理.染色強度按著色強弱但明顯強于陰性對照者為1分,染色清晰者為2分,染色強者為3分;陽性細胞占總細胞數(shù)的10﹪～50﹪者為2分,51﹪～80﹪者為3分,>80﹪者為4分.上述兩相評分相加,只要陽性細胞數(shù)<10﹪者為(-);弱陽性表達(+):3分;陽性表達(++):4～5分;強陽性表達(+++):6～7分.MVD值取微血管密集的部位,高倍鏡(×200)5個視野平均值. 3.統(tǒng)計學

8、處理將所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計處理.計量資料采用均數(shù)±標準差表示(x±s),用t檢驗;計數(shù)資料采用X<'2>檢驗;兩變量間的相關性采用非參系統(tǒng)中的Spearman等級相關進行分析.顯著性水準α=0.05. 結果 1.CD34在CA組織和正常包皮組織中的表達CA組與正常對照組相比真皮微血管明顯增多且有管腔擴張.CA組織的MVD值(42.52±5.60)明顯高于正常對照組(26.36±6.60),二者差異有顯著

9、性(t=-13.361,P<0.01). 2.VEGF在CA組織和正常包皮組織中的表達35例CA組織均表達VEGF,陽性率100﹪(35/35),表達強度多在(++～+++),15例J下常包皮對照組織中均表達VEGF,陽性率100﹪(15/15).VEGF在CA組織除角質(zhì)層外的表皮全層細胞均有強表達,正常組織中僅有弱的表達,且主要在基底層表達.正常包皮組織表達強度多在(+～++);CA組織與正常對照組VEGF陽性表達率差異無顯著

10、性,但兩組陽性表達強度比較差異有統(tǒng)計學意義(x<'2>=17.388,P<0.01). 3.HIF-la在CA組織和正常包皮組織中的表達 35例CA組織中HIF-la陽性表達33例,占94.3﹪(33/35),表達強度多在(++～+++),正常對照組陽性表達率66.7﹪(10/15),表達強度多在(-～+);CA組織與正常對照組陽性率及陽性表達強度差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01). 4.MMP-9在CA組織和正常包皮組

11、織中的表達35例CA組織均表達MMP-9,陽性率100﹪(35/35),表達強度多在(++～+++),正常組織中陽性率86.7﹪(13/15),表達強度多在(+～++);CA組織與正常對照組陽性率比較無統(tǒng)計學意義(x<'2>=2.009,P>0.05),但兩組陽性表達強度差異有統(tǒng)計學意義(x<'2>=21.805,p<0.01). 5.CA組織中VEGF、HIF-la及MMP-9表達與MVD值之間的表達情況及相關性分析CA組織中

12、VEGF、HIF-1α、MMP-9的表達均與MVD值成正相關,且隨著表達強度的增強MVD值亦隨之增加.(r=0.895,0.748,0.835 P<0.01). 6.CA組織中VEGF表達與HIF-1α、MMP-9表達之間的相關性分析CA組織中VEGF與HIF-1α及MMP-9陽性表達強度比較分別呈正相關,(r=0.828,0.748<0.01),HIF-1α與MMP-9表達強度也具有相關性,(r=0.664,P<0.01).

13、 結論 1.VEGF、HIF-1α MMP-9在CA組織中的表達強度均高于對照組,提示VEGF、HIF-lα、MMP-9在CA的生長過程中具有重要作用.2.VEGF、HIF-1α、MMP-9的表達強度與MVD均呈正相關,表明在CA組織中VEGF、HIF.1α、MMP-9可能通過促進血管生成,進而刺激CA的生長.3.CA組織中VEGF表達與HIF-1α表達呈正相關,提示在缺氧狀態(tài)下CA組織中HIF-1α表達上調(diào)可能通過激活V