Bad和PCNA在尖銳濕疣組織中的表達及意義.pdf

1、背景和目的：
　　尖銳濕疣(condyloma acuminatum，CA)是人類乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV)感染皮膚粘膜引起的良性贅生物，好發(fā)于外生殖器、肛周、尿道口、宮頸，偶可見于趾間、口腔、臍窩等部位。近年來CA的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，是目前我國很常見的性傳播性疾病(sexually transmitte diseases，STD）之一，該病主要發(fā)生在性活躍的人群中，多見于青壯年男女。雖然C

2、A是一種良性的增生性疾病，但其具有傳染性強，疣體增長迅速，治療后常易復發(fā)等特點，且部分巨大型CA有癌變傾向，致使患者心理壓力大，甚至部分患者出現(xiàn)抑郁癥狀，嚴重影響患者的身心健康，該病成為國家疾病控制中心(centers for disease control，CDC)重點檢測的STD之一。
　　CA皮損生長快，治療后高復發(fā)率，這可能與CA組織中存在異常增殖和凋亡的角質形成細胞有關，但關于CA組織中角質形成細胞異常增殖和異常凋亡的確

3、切機制尚不十分清楚，這種異常增殖和凋亡可能受到多種凋亡相關基因的調控。促凋亡蛋白Bad是Bcl-2家族蛋白中的一員，同時具有BH3同源結構區(qū)域和序列，可以促進細胞凋亡。當?shù)蛲龃碳ば盘柎嬖冢蓪е翨ad的結構發(fā)生改變，其活化后即轉位到線粒體外膜與Bcl-xL結合，從而誘導細胞凋亡。多項研究表明，促凋亡蛋白Bad對多種腫瘤的形成、轉移有著重要的意義。PCNA是一種酸性的核蛋白，作為DNA聚合酶的一種輔酶，可以參加細胞異常增殖過程中DNA的復

4、制，而且還與細胞周期的調節(jié)密切相關，PCNA是目前公認的腫瘤細胞S期的一種標志物，已被廣泛應用于細胞異常增生的實驗研究。但促凋亡蛋白Bad在CA組織中的表達情況以及其和PCNA的相關性缺乏研究，為探究CA組織中Bad的表達情況及其與PCNA之間的關系，本實驗采用免疫組化的方法檢測Bad和PCNA在CA組織和正常包皮組織中的表達情況，探討B(tài)ad和PCNA在CA的發(fā)生、發(fā)展中的可能病理機制。
　　材料與方法：
　　1.材料

5、>　　53例CA患者皮損組織標本為實驗組，其中男性32例，女性21例；年齡16～65歲，平均32.5士8.7歲；病程14天～180天，平均50.7士4.3天。實驗組標本均來自2015年9月至2016年9月鄭州大學第一附屬醫(yī)院皮膚與性病科門診患者。所有入選患者臨床表現(xiàn)典型，醋酸白實驗陽性，皮損行組織病理檢查并符合CA的組織學表現(xiàn)，分子生物學實驗證明有HPV感染存在，均與CA的診斷標準相符合，無其他系統(tǒng)性疾病，皮損取材前患者均未接受免疫性的

6、藥物、冷凍、激光等任何相關治療。28例正常對照組標本都來自我院泌尿科成年男性包皮環(huán)切術后所切除的包皮組織，并經(jīng)組織病理檢查證明其為正常的組織上皮。
　　2.方法
　　采用免疫組化的方法檢測Bad和PCNA的表達情況，所有的實驗步驟嚴格按照所用試劑盒上的說明進行操作。Bad陽性表達主要處于細胞膜和細胞質，陽性細胞顯色為棕黃色至棕褐色顆粒。PCNA陽性表達定位于細胞核，棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。參照文獻評分標準，根據(jù)組織切片

7、中細胞染色強弱及陽性細胞所占總細胞的百分比實行分級評分。染色強度分為不著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色，分別對應著0分、1分、2分、3分。陽性細胞占總細胞的百分比：小于等于10％為0分，在11％和25％之間為1分，在26％和50％之間為2分，在51％和75％之間為3分，大于等于76％為4分。最后將上述兩項分值的乘積作為最終得分：得分為0分，判定陰性（-）；分值在1分和4分之間，判定為弱陽性（+）；5分至8分，判定為陽性（++）；9分至12分

8、，判定為強陽性（+++）。
　　3.統(tǒng)計學處理
　　將實驗所得的數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，用χ2檢驗Bad和PCNA的陽性表達率差異，Bad和PCNA的陽性表達強度應用秩和檢驗的方法，運用非參系統(tǒng)中的Spearman方法分析CA組織中Bad和PCNA之間的相關性，檢驗標準P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.Bad在CA組織和正常包皮組織中的表達
　　53例CA患者組織

9、中，Bad出現(xiàn)陽性表達為37例，其陽性表達率為69.81%（37/53），陽性表達的強度多呈++～+++，陽性顯色主要位于細胞膜和細胞質；28例正常包皮組織細胞中 Bad出現(xiàn)陽性表達為8例，其陽性表達率為28.57%(8/28)，陽性表達的強度多呈-～+。實驗組和對照組中Bad的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=18.436，P<0.05），Bad在兩組中的陽性表達強度有明顯的統(tǒng)計學差異（H=23.063，P<0.05）。
　　2

10、.PCNA在CA組織和正常包皮組織中的表達
　　53例CA患者組織中，PCNA出現(xiàn)陽性表達為46例，其陽性率為86.79%（46/53），陽性表達的強度多呈++～+++，陽性顏色主要位于細胞核，大多數(shù)呈棕褐色顆粒；28例對照組中PCNA出現(xiàn)陽性表達為11例，其陽性表達率為39.28%，陽性表達強度大多數(shù)呈+～++。兩組中PCNA的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.356，P<0.05），PCNA在兩組中的陽性表達強度有明顯的統(tǒng)

11、計學差異（H=13.452，P<0.05）。
　　3.Bad和PCNA在CA組織中表達的相關性分析
　　在37例Bad表達陽性中，PCNA陽性表達的有31例，6例陰性；在46例PCNA蛋白表達陽性中，Bad出現(xiàn)陽性表達的有31例，陰性15例。經(jīng)過Spearman相關分析CA組織中Bad與PCNA的陽性表達呈正相關（r=0.379，P<0.05）。
　　結論：
　　1．Bad在CA組織中的陽性表達率和陽性表達強度均

12、高于對照組，表明CA組織中存在Bad的過表達，這種過表達提示Bad在一定程度上能促進CA組織中角質形成細胞的凋亡，抑制CA的過度增生。
　　2．PCNA在CA組織中的陽性表達率和陽性表達強度均高于對照組，表明CA組織中存在PCNA的高表達，這種高表達提示CA組織中角質形成細胞存在異常的增殖。
　　3．在CA組織中促凋亡蛋白Bad和增殖細胞核抗原PCNA之間的表達呈正相關，提示Bad和PCNA可能共同參與CA的發(fā)生、發(fā)展，也提