MDR1 siRNA對結(jié)腸癌細胞多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、中山大學博士學位論文M D R I s i R N A 對結(jié)腸癌細胞多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用R e v e r s a lo f m u l t i d r u g r e s i s t a n c eb yM D R l s i R N A i nc o l o nc a n c e r c e l l s專業(yè)：內(nèi)科學消化專業(yè)博士生：夏忠勝導師：朱兆華教授答辯主席：答辯委員：答辯委員：答辯委員：答辯委員：胡品津李瑜元姜泊陳其奎詹俊中山大

2、學·中國廣州2 0 0 7 年4 月2 8 日教授教授教授教授教授M D R Is i R N A 塒結(jié)腸癌細胞多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作I } 】 中文摘要i n t e r f e r e n c e ．R N A i ) 技術(shù)。R N A i 依賴s i R N A 與m R N A 之間序列特異性的相瓦作用，s i R N A 與R N A 誘導的沉默復合物( R N A i n d u c e d s i l e n c i

3、 n g c o m p l e x ，R I S C )結(jié)合而活化R I S C ，其中的反義鏈以高度的序列特異性方式作用丁二靶m R N A ，進而降解m R N A 。本研究中，我們選擇C O L O3 2 0 D M 結(jié)腸癌細胞來探討s i R N A 對結(jié)腸癌細胞M D R 的逆轉(zhuǎn)作用，將H T - 2 9 結(jié)腸癌細胞作為對照細胞。并選擇5 ．F u 、A d r i a m y c i n及V i n c r i s t i

4、 n e 三種抗腫瘤藥來觀察R N A 干擾效應對結(jié)腸癌細胞多藥耐藥性的影響。在瞬時轉(zhuǎn)染實驗部分，本研究采用兩種人工合成的M D R Is i R N A s 轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細胞，觀察M D R Is i R N A s 能否抑制結(jié)腸癌細胞M D R lm R N A 和P - g p 的表達。并進一步觀察轉(zhuǎn)染M D R Is i R N A s 及聯(lián)合應用抗腫瘤藥后，結(jié)腸癌細胞在細胞生長、細胞動力學及細胞內(nèi)藥物累積濃度等方面的變化。在穩(wěn)定

5、轉(zhuǎn)染實驗部分，用s i R N A 表達載體轉(zhuǎn)染C O L O 3 2 0 D M 結(jié)腸癌細胞，采用G 4 1 8 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆細胞，并采用R T - P C R 及W e s t e r n b l o t 鑒定篩選陽性克隆細胞。從陽性克隆細胞中選擇代表性克隆用f 基因沉默效應的進一步觀察，包括M D R I m R N A 的表達、P - g p 的表達、I C 5 0 測定、細胞動力學分析及細胞內(nèi)抗腫瘤藥累積濃度的測定等。研

6、究目的探討M D R I s i R N A 對結(jié)腸癌細胞多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用。材料和方法s i l T u N A 的合成及轉(zhuǎn)染根據(jù)德國C e n i xB i o s c i e n c e sG m b H 公司推薦的s i R N A 設計原則，設計靶向M D R I 基因( 基因序列號N M0 0 0 9 2 7 ) 的s i R N A 序列。兩種s i R N A ( # 4 1 2 3 M D R ls i R N A