酪絲纈肽對(duì)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 研究三肽化合物酪絲纈肽（Tyroservatide，YSV）對(duì)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞耐藥性的體外逆轉(zhuǎn)作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用MTS法觀察人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU及人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR對(duì)化療藥物5-氟尿嘧啶（5-FU）、阿霉素（DOX）、長(zhǎng)春新堿（VCR）的交叉耐藥性。
　　 2.以人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402-FU

2、及人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR為研究對(duì)象，應(yīng)用MTS法觀察YSV對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用；選擇低細(xì)胞毒作用的YSV劑量，研究其對(duì)細(xì)胞耐藥性的體外逆轉(zhuǎn)作用。
　　 3.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察YSV對(duì)多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素、羅丹明123蓄積量的影響。
　　 4.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot方法，觀察YSV對(duì)耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/A

3、DR細(xì)胞中耐藥基因MDR1 mRNA及其蛋白產(chǎn)物P-gp表達(dá)的影響；并進(jìn)一步觀察YSV對(duì)MDR1的調(diào)控因子PKCa蛋白表達(dá)的影響。
　　 5.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot方法，觀察YSV對(duì)多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU、MCF-7/ADR細(xì)胞中其它耐藥相關(guān)基因MRP1、LRP、GST-πmRNA及其蛋白表達(dá)的影響。
　　 6應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和DNA Ladder檢測(cè)方法研究人肝癌耐藥細(xì)胞BEL-

4、7402/5-FU其耐藥性與凋亡受抑之間的關(guān)系；觀察YSV與化療藥物合用時(shí)對(duì)BEL-7402/5-FU細(xì)胞凋亡的影響。
　　 7.應(yīng)用Western Blot方法，觀察YSV對(duì)人肝癌耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU細(xì)胞中凋亡抑制因子Bcl-2、Bcl-xL及抑癌基因P53蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.人肝癌耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU對(duì)5-FU及DOX的耐藥倍數(shù)分別為287.39、5.89倍，

5、人乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR對(duì)DOX及VCR的耐藥倍數(shù)分別為18.74、8.08倍。
　　 2.YSV（0.1～1.6mg/ml）對(duì)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR“的增殖具有劑量依賴性抑制作用趨勢(shì)。對(duì)于BEL-7402/5-FU細(xì)胞，0.8mg/ml以下濃度為低細(xì)胞毒劑量；對(duì)于MCF-7/ADR細(xì)胞，1.6mg/ml以下濃度為低細(xì)胞毒劑量。
　　 3.YSV（0.4、0.8mg/ml

6、）在體外能夠部分逆轉(zhuǎn)人肝癌耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU對(duì)5.FU、DOX的耐受性；YSV（0.8、1.6mg/ml）在體外能夠部分逆轉(zhuǎn)人乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR對(duì)DOX、VCR的耐受性。
　　 4.YSV可顯著增加多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素、羅丹明123的蓄積量。
　　 5.YSV可顯著抑制多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)多藥耐藥基

7、因MDR1的mRNA及其蛋白產(chǎn)物P-gp的表達(dá)，同時(shí)抑制MDR1的調(diào)控因子PKCα的蛋白表達(dá)；YSV可顯著抑制BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)其它耐藥相關(guān)基因LRP、GST-π的mRNA及蛋白表達(dá)，降低MRP1蛋白水平。
　　 6.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，與其親本細(xì)胞BEL-7402相比，耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU能夠顯著抵抗5-FU的誘導(dǎo)凋亡作用；YSV（0.4、0.8mg/ml）與5-FU聯(lián)用后，人肝

8、癌耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU的凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著增加，并形成明顯的DNA ladder。
　　 7.YSV可抑制人肝癌耐藥細(xì)胞BEL-7402/5-FU細(xì)胞內(nèi)抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的蛋白表達(dá)，促進(jìn)抑癌基因P53的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 YSV可有效逆轉(zhuǎn)耐藥腫瘤細(xì)胞BEL-7402/5-FU及MCF-7/ADR對(duì)化療藥物的耐受性，部分恢復(fù)細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。YSV逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機(jī)制可能