腫瘤多藥耐藥性逆轉的相關研究.pdf

1、腫瘤細胞多藥耐藥性的產生，目前已經成為腫瘤化學治療失敗的主要原因。所謂多藥耐藥性是指腫瘤細胞在對一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥的同時，對其他多種結構各異、作用機制不同的抗腫瘤藥物同時產生交叉耐藥的現(xiàn)象。腫瘤細胞的多藥耐藥性現(xiàn)象是腫瘤治療中出現(xiàn)的最常見和最棘手的問題，要提高惡性腫瘤化療的有效性，必須深入研究多藥耐藥性產生的機制并尋求有效的逆轉多藥耐藥性的對策。 MDRl(multidrugresistancegene1)基因的表達產物P-

2、糖蛋白(P-glycoprotein)是一個170kDa的糖蛋白，在多種多藥耐藥細胞株中高表達，是產生多藥耐藥性的主要原因。嘗試降低MDRl基因的表達，抑制P-糖蛋白的功能是目前逆轉多藥耐藥性的主要策略。 利用RNA干擾技術來沉默MDRl基因的表達是逆轉多藥耐藥性的有效方法之一。論文的第一部分采用核酸內切酶制備針對MDRl基因的小干擾RNA(esiMDRl，endonuclease-preparedsiMDRl)，研究esiMD

3、Rl對MDRl基因表達沉默的作用。結果顯示，相對于未轉染的MCF-7／R(阿霉素耐受的MCF-7乳腺癌細胞)細胞，轉染esiMDRl的MCF-7／R細胞株中MDRl基因的mRNA減少了50％，羅丹明123滯留量增加了30％，對柔紅霉素的ICso值從4．5[xM減少到1.2μM。這些結果表明針對MDRl基因的esiRNA能夠有效下調內源性P-糖蛋白的表達和功能。 MDRl基因的表達對細胞內ROS水平的變化高度敏感，論文第二部分工作

4、研究了抗氧化劑(過氧化氫酶或N-乙酰半胱氨酸)對HepG2細胞中MDRl基因表達的影響。將過氧化氫酶(catalase)和N．乙酰半胱氨酸(NAC)加入到HepG2的細胞培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)，P-糖蛋白敏感的藥物轉運活性提高了(羅丹明123藥物的滯留)，MDRl基因的mRNA也有了明顯的上調(RT-PCR)，catalase處理48小時HepG2細胞中P-糖蛋白的蛋白表達量也有相應地上調(Westernblotting)。實驗發(fā)現(xiàn)，catala

5、se和NAC的加入導致細胞中ROS降低。而且JNK抑制劑SP600125能夠解除catalase對P-糖蛋白藥物轉運活性的上調作用。這些數(shù)據表明catalase上調P-糖蛋白是通過降低了細胞內的ROS而介導的，其中涉及到JNK的參與，而且這種現(xiàn)象在HepG2細胞中是比較特殊的。 有文獻報道P-糖蛋白的表達和功能受到多種細胞因子(TNFa，IL-1β，IL-6，IL-2，IFNγ等)和病理因素的調節(jié)，影響藥物的吸收和滯留。論文第三

6、部分的工作研究了TNFa對HepG2，Caco-2，MCF-7／R細胞中MDRl基因表達情況的影響，并檢測了TNFa與化療藥物阿霉素共同作用對細胞存活率的變化。結果顯示對于HepG2細胞，300U／ml的TNFa能微弱的下調MDRl基因的表達，而高劑量(30000U／ml)的TNFa能夠上調MDRl基因的表達；但用300U／mi的TNFa與阿霉素共同作用，并沒有改變細胞對化療藥物的敏感性；在Caco-2細胞中，30000U／ml的TNF

7、a降低了50％的MDRl基因啟動子的啟動效率，而且在這個劑量下細胞對阿霉素的敏感性有了明顯的增強；在MCF-7／R細胞中，300U／ml的TNFa雖然不能明顯的影響MDRl基因啟動子的啟動效率，但卻增強了細胞對阿霉素的敏感性。這些結果證實了TNFa與化療藥物聯(lián)合使用對腫瘤細胞有一定的增敏作用，但是這種作用與MDR!基因表達變化的相關性在不同的細胞中存在著差異。 本論文采用了三種不同的途徑來逆轉多藥耐藥性，即esiMDRl，抗氧化