針刺豐隆穴預防小鼠高膽固醇血癥的相關(guān)基因研究.pdf

1、針刺在臨床降低高膽固醇血癥中已具有較肯定的療效，而我們已有的實驗也證明了針刺豐隆穴可以預防小鼠的高膽固醇血癥。在本實驗室的前期工作中，共獲得6組不同處理的小鼠肝臟樣品，分別是正常組(NM)、高脂組(HC)、針刺治療組(EA)、他汀組(ST)、針刺預防組(EP)、針刺非穴位組(EN)。對各組小鼠血液多項生化指標的分析結(jié)果表明，針刺豐隆穴可以有效預防高膽固醇小鼠血漿總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平的升高。本文以高膽固醇血

2、癥組與針刺預防組小鼠為模型，對其肝臟組織的基因表達進行比較研究，為理解針刺預防高膽固醇血癥的機制從分子水平上提供了實驗證據(jù)。 在本實驗中，我們選取高脂組、針刺預防組2組小鼠肝臟組織，應用SMART技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄并擴增以獲取2組小鼠肝臟細胞的全長總cDNA,運用抑制消減雜交(Suppression Subtractive Hybridization，SSH)技術(shù)獲得正反2個方向的差異表達基因譜。為了消除SSH過程中所產(chǎn)生的假陽性克隆，

3、首先采用一種新的消除背景的方法(Negatire Subtraction Chain，NSC)方法去除了SSH PCR所產(chǎn)生的部分假陽性產(chǎn)物。在SSH-NSC富集差異基因的基礎(chǔ)上，我們采用了斑點雜交的方法對2個文庫進行了差異基因的進一步篩選，共獲得22個差異片段，克隆并測序。經(jīng)過序列測定和分析，共得到11個在針刺預防組中上調(diào)表達基因和5個下調(diào)表達基因。除了2個基因功能未知以外，其他可分類的基因分別與膽固醇代謝，脂代謝，糖代謝，免疫調(diào)控等