家族性高膽固醇血癥患者LDL受體基因突變及突變基因補償?shù)那捌谘芯?pdf

1、[目的]
　　家族性高膽固醇血癥(familial hypercholesterlolemia, FH)是一種常見的常染色體單基因顯性遺傳性疾病,是導(dǎo)致動脈粥樣硬化和早發(fā)冠心病的重要危險因素。本文探討了FH患者LDL-R活性特點,并通過對正常人LDL-R基因cDNA序列的克隆,為下一步對FH患者LDLR基因突變克隆體的補償?shù)於肆己玫幕A(chǔ)。
　　[方法]
　　以一家族性高膽固醇血癥先證者為研究對象,對其進行常規(guī)體格檢查

2、,血脂等生化指標(biāo)的測定及心血管超聲等檢查,PCR擴增結(jié)合直接測序檢測先證者LDLR基因突變。分離培養(yǎng)先證者外周血淋巴細(xì)胞,以含10％無脂血清(Lipoprotein deficiency serum,LPDS)的1640培養(yǎng)基誘導(dǎo)其LDL-R的最大活性后,加入異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)標(biāo)記的LDL,分別于4℃和37℃孵育1.5小時,PE-CD3標(biāo)記T淋巴細(xì)胞分別于4℃和37℃孵育45

3、分鐘,流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞表面結(jié)合、攝取LDL的平均熒光強度。同時,用SMART RACE cDNA技術(shù)克隆正常人LDL-R基因cDNA并測序。
　　[結(jié)果]
　　FH先證者第三內(nèi)含子存在G→A剪接純合突變,其淋巴細(xì)胞表面LDL-R對LDL的結(jié)合與攝取活性均較正常人明顯降低,少量細(xì)胞尚有殘余的受體結(jié)合活性。SMART RACE cDNA技術(shù)獲得LDL-R基因cDNA第一外顯子到第十外顯子基因序列。
　　[結(jié)論]