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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本研究觀察黃癸素聯(lián)合用藥的體內(nèi)和體外抗腫瘤作用;黃癸素抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制;黃癸素對(duì)化學(xué)誘導(dǎo)的倉鼠頰癌的防治作用。
方法:(1)應(yīng)用MTT法檢測(cè)黃癸素聯(lián)合臨床常用藥對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。(2)應(yīng)用小鼠移植性實(shí)體瘤H22、S180的治療試驗(yàn)觀察黃癸素聯(lián)合5-FU的體內(nèi)抗腫瘤活性。(3)通過瓊脂糖凝膠電泳法測(cè)定黃癸素對(duì)SW480細(xì)胞DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶活性的影響。(4)細(xì)胞-基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃癸素對(duì)B16細(xì)胞
2、粘附能力的影響。(5)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃癸素對(duì)B16細(xì)胞遷移能力的影響。(6)應(yīng)用Transwell小室重建基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)分析黃癸素對(duì)B16 細(xì)胞趨化能力的影響。(7)免疫S-P法測(cè)定黃癸素對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)因子CD44V6表達(dá)的影響。(8)明膠酶譜法測(cè)定黃癸素對(duì)腫瘤細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬酶MMP-2、MMP-9 表達(dá)和活性的影響。(9)黃癸素對(duì)B16細(xì)胞C57BL/6小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的影響。(10)黃癸素對(duì)H22細(xì)胞小鼠實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的影響。(1
3、1)建立DMBA 誘導(dǎo)的倉鼠頰囊癌變的動(dòng)物模型,于6周、9周和12周系統(tǒng)觀察黃癸素治療組和對(duì)照組的局部病變情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)束進(jìn)行病理學(xué)檢查。
結(jié)果:
一、黃癸素聯(lián)合用藥的抗腫瘤療效及相關(guān)機(jī)制黃癸素聯(lián)用羥喜樹堿對(duì)SGC-7901、SW116、HepG2、SW480 細(xì)胞具有顯著的協(xié)同抑制作用,與5-FU聯(lián)用對(duì)MGC-803、SGC-7901、SW116細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用;與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S18
4、0實(shí)體瘤的在體生長;黃癸素對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶都Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。
二、黃癸素抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制初探黃癸素可抑制B16細(xì)胞與基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,抑制作用呈濃度依賴性。
劃痕實(shí)驗(yàn)中,在原始致傷區(qū)的基礎(chǔ)上,用藥組細(xì)胞在Fn上的遷移均受到明顯抑制。Transwell小室,藥物與細(xì)胞作用48h后,細(xì)胞穿越基底膜的能力顯著低于對(duì)照組,細(xì)胞侵襲數(shù)與藥物濃度成反比。通過黃癸素作用的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清所表達(dá)的MMP-2、
5、MMP-9活性較對(duì)照組有顯著的降低。在體試驗(yàn)顯示黃癸素有一定程度抑制C57BL/6小鼠黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移、小鼠H22肝癌肺轉(zhuǎn)移的作用。
三、黃癸素對(duì)化學(xué)誘導(dǎo)倉鼠頰癌的抑制作用黃癸素36、54、72mg/kg分別作用于DMBA誘導(dǎo)的倉鼠,第9周開始高劑量即有抑制病變發(fā)生的作用,第12周病理檢查見其頰粘膜的不典型增生發(fā)生率、鱗癌發(fā)生率均有不同程度降低,54、72mg/kg組倉鼠頰粘膜的不良增生總發(fā)生率分別為66.6[%]、53.3
6、[%],比模型組(86.6[%])分別降低了20[%]和33.3[%]。
結(jié)論:黃癸素與5-FU、羥喜樹堿對(duì)體外培養(yǎng)的多種腫瘤細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用,可能與其對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶都Ⅰ、Ⅱ活性的抑制作用有關(guān)。在體試驗(yàn)表明黃癸素與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S180實(shí)體瘤的在體生長。細(xì)胞試驗(yàn)顯示黃癸素可降低B16細(xì)胞的粘附、侵襲和遷移能力。在體試驗(yàn)顯示黃癸素可抑制B16黑色素腫瘤和H22肝癌的肺轉(zhuǎn)移。黃癸素對(duì)化學(xué)誘導(dǎo)倉鼠頰癌有抑制
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