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文檔簡介
1、目的:許多流行病學及體外體內腫瘤相關研究已經證實,十字花科植物中的天然代謝產物-異硫氰酸酯(isothiocyanates,ITCs),尤其是萊菔硫烷(sulforaphane,SFA),既能在腫瘤起始前預防腫瘤發(fā)生又能在腫瘤發(fā)生發(fā)展階段殺傷腫瘤。我們的前期研究成功從萊菔子中分離純化出一種萊菔硫烷的結構類似物-萊菔素(sulforaphene,SFE),并推測其具有和萊菔硫烷相似的抗癌活性。本研究選擇在中國人群中高發(fā)的食管鱗癌和乳腺癌為
2、研究對象,體外體內試驗評價萊菔素的抗腫瘤活性,并試圖揭示萊菔素在這兩種腫瘤中的抗腫瘤作用機制。
方法:MTT法體外評價萊菔素的抗腫瘤活性,流式細胞術觀察萊菔素對細胞周期和細胞凋亡的影響。Western Blot法分析DNA損傷和細胞周期相關標志物蛋白水平和磷酸化變化,利用基因芯片技術進行表達譜分析腫瘤細胞在萊菔素給藥前后基因表達水平的改變,熒光定量PCR驗證芯片結果。構建基因過表達質粒瞬時轉染腫瘤細胞研究基因表達對腫瘤的影響。
3、裸鼠成瘤試驗體內評價萊菔素的抗乳腺癌活性。
結果:萊菔素體外能夠有效抑制食管鱗癌和乳腺癌細胞生長,48小時抑制食管鱗癌和乳腺癌細胞的IC50均在25μM以內,與萊菔硫烷比較二者IC50無顯著差別。流式細胞術結果顯示,萊菔素可將人食管鱗癌細胞KYSE150和KYSE30阻滯在G2/M期,這可能與萊菔素誘導DNA損傷尤其是雙鏈損傷(DSB)有關,同時還發(fā)現細胞內活性氧簇物質(ROS)的積累也部分貢獻了萊菔素對KYSE細胞的抑制作用
4、。乳腺癌裸鼠成瘤試驗進一步顯示萊菔素能夠有效抑制乳腺癌移植瘤的生長,且表現出很小的毒性。基因表達譜分析發(fā)現EGR1基因在乳腺癌細胞中被萊菔素上調表達18倍,而且熒光定量PCR結果與芯片結果基本一致。在乳腺癌細胞內上調EGR1基因表達能夠抑制乳腺癌細胞的生長。利用臨床數據進行生存曲線分析顯示EGR1高表達的乳腺癌病人生存期相對更長,預后更好(HR=0.76,p=3.5e×10-6)。結果提示EGR1基因應該是萊菔素抑制乳腺癌細胞的一個重要
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