抗腫瘤蛋白的篩選、鑒定及抗腫瘤多肽的優(yōu)化設(shè)計(jì).pdf

1、腫瘤是影響人類健康的重大疾病之一，目前臨床腫瘤藥物主要為小分子化療藥物。為進(jìn)一步發(fā)掘并開(kāi)發(fā)蛋白/多肽類抗腫瘤藥物，本研究擬從蜂王漿中篩選抗腫瘤活性蛋白;此外，以蝎毒多肽為模板，優(yōu)化設(shè)計(jì)抗腫瘤多肽。
　　分別以喀爾巴阡蜂蜂王漿（簡(jiǎn)稱RJK）和雜交三代新疆黑蜂蜂王漿（簡(jiǎn)稱RJX）為原料，經(jīng)過(guò)初步分離得到蜂王漿水溶蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白。經(jīng)細(xì)胞毒性篩選確定醇溶蛋白具有明顯的抗腫瘤活性。進(jìn)一步分離醇溶蛋白得到兩種組分，分別為RJE

2、(50kD)和RJF(60kD)。其中，RJF具有明顯抗腫瘤活性，而RJE活性不明顯。采用Protein identification、MALDI-TOF-MS、Edman降解等方法對(duì)RJF進(jìn)行鑒定、分析，確定RJF為一種新的抗腫瘤活性蛋白。
　　以課題組前期獲得的一條蝎毒多肽衍生的抗腫瘤多肽ZXR-2(FKIGGFIKKLWRSLLA)為模板，設(shè)計(jì)了四組多肽。第一組和第二組分別用丙氨酸和纈氨酸對(duì)序列中異亮氨酸(I)和亮氨酸(L)

3、進(jìn)行了逐個(gè)替換，得到ILA和ILV兩個(gè)系列多肽。第三組將ZXR-2的序列分別從C端和N端縮短，得到ILC與ILN系列多肽。第四組為以亮氨酸、賴氨酸和丙氨酸設(shè)計(jì)的模式多肽(LKA系列多肽)。ILA系列和ILV系列在破壞間隔七個(gè)氨基酸的I-L氨基酸對(duì)后，其抗腫瘤和抗菌活性有明顯下降，分析發(fā)現(xiàn)其活性與疏水力矩有一定的正相關(guān)。乳酸脫氫酶釋放(LDH)實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀分析表明ILA和ILV系列多肽對(duì)細(xì)胞膜有裂解作用，說(shuō)明I-L氨基酸對(duì)的破壞對(duì)多肽