大鼠頸動脈外膜損傷對平滑肌細胞凋亡及Fas表達的影響.pdf

1、[目的]
　　研究Fas在大鼠頸動脈外膜損傷后動態(tài)表達及其與血管平滑肌細胞(VSMC)凋亡的關(guān)系，并探討其對內(nèi)膜增生作用的可能機制，為Fas作為治療血管重建術(shù)后再狹窄的新靶點提供理論基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　清潔級健康SD雄性大鼠30只，隨機分為對照組（6只）和手術(shù)組（24只，包括1d、7d、14d、28d組）。Ⅱ型膠原酶化學消化及眼科鑷鈍性分離法造成大鼠左側(cè)頸動脈外膜損傷，右側(cè)假手術(shù)處理，建立動物模型。手術(shù)各亞組分別

2、于術(shù)后1、7、14、28天手術(shù)切取損傷頸動脈及假手術(shù)側(cè)作為實驗標本，對照組不予手術(shù)處理，28天后處死取左側(cè)頸動脈作為實驗標本。分別進行下列檢測:(1)血管形態(tài)學檢測:切片HE染色，顯微鏡下觀察血管內(nèi)膜增生情況，并在計算機圖像分析儀下測量、分析血管內(nèi)膜面積;(2) SP染色法免疫組織化學檢測Fas表達及TUNEL技術(shù)檢測凋亡細胞。高倍光學顯微鏡下觀察并計算陽性細胞百分比，觀察術(shù)后不同時間Fas表達變化及其與凋亡細胞的關(guān)系。(3) Real

3、 Time RT-PCR檢測各組Fas在mRNA水平的表達情況。
　　[結(jié)果]
　　1.大鼠頸動脈外膜損傷后內(nèi)膜開始增生，隨著時間的延長血管內(nèi)膜面積逐漸升高，在28天達到高值（與假手術(shù)側(cè)及對照組比較，均P＜0.01）。
　　2.免疫組化染色結(jié)果顯示:(1)正常動脈只是極偶然見到Fas陽性細胞表達，F(xiàn)as陽性的VSMC細胞始出現(xiàn)在外膜損傷術(shù)后1天，并逐漸增多，至7天時達到高峰，此后表達逐漸下降，28天時僅在中膜有少量表達

4、，但仍高于正常水平(P＜0.05)。(2)凋亡細胞檢測在正常動脈中TUNEL陽性表達極低，術(shù)后1天表達開始升高，至7天時達高峰，后逐漸下降，術(shù)后14天迅速回落，28天降至最低，但仍高于正常水平(P＜0.05)。(3) Fas和凋亡細胞表達呈明顯正相關(guān)(r=0.983，P＜0.01)。
　　3.Real Time RT-PCR結(jié)果顯示正常動脈Fas mRNA表達極低，術(shù)后1天Fas mRNA表達開始升高，7天明顯升高，至14天時達到

5、高峰(P＜0.01)。14天后Fas mRNA表達量開始下降，至28天進一步下降，但仍明顯高于對照組及假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　1.血管外膜損傷后動脈出現(xiàn)內(nèi)膜增生，可能主要由VSMC凋亡與增殖失衡所致，術(shù)后7-14天為凋亡速降的關(guān)鍵時間窗，術(shù)后28天增生的新生內(nèi)膜面積達到高值。
　　2.血管外膜損傷導致內(nèi)膜增生過程中，F(xiàn)as是VSMC凋亡及抗衡血管內(nèi)膜增生的重要因子之一。
　　3.通過本實驗結(jié)