大鼠頸動(dòng)脈外膜損傷對(duì)平滑肌細(xì)胞凋亡及Fas表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　研究Fas在大鼠頸動(dòng)脈外膜損傷后動(dòng)態(tài)表達(dá)及其與血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)凋亡的關(guān)系，并探討其對(duì)內(nèi)膜增生作用的可能機(jī)制，為Fas作為治療血管重建術(shù)后再狹窄的新靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　清潔級(jí)健康SD雄性大鼠30只，隨機(jī)分為對(duì)照組（6只）和手術(shù)組（24只，包括1d、7d、14d、28d組）。Ⅱ型膠原酶化學(xué)消化及眼科鑷鈍性分離法造成大鼠左側(cè)頸動(dòng)脈外膜損傷，右側(cè)假手術(shù)處理，建立動(dòng)物模型。手術(shù)各亞組分別

2、于術(shù)后1、7、14、28天手術(shù)切取損傷頸動(dòng)脈及假手術(shù)側(cè)作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，對(duì)照組不予手術(shù)處理，28天后處死取左側(cè)頸動(dòng)脈作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。分別進(jìn)行下列檢測(cè):(1)血管形態(tài)學(xué)檢測(cè):切片HE染色，顯微鏡下觀察血管內(nèi)膜增生情況，并在計(jì)算機(jī)圖像分析儀下測(cè)量、分析血管內(nèi)膜面積;(2) SP染色法免疫組織化學(xué)檢測(cè)Fas表達(dá)及TUNEL技術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞。高倍光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比，觀察術(shù)后不同時(shí)間Fas表達(dá)變化及其與凋亡細(xì)胞的關(guān)系。(3) Real

3、 Time RT-PCR檢測(cè)各組Fas在mRNA水平的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]
　　1.大鼠頸動(dòng)脈外膜損傷后內(nèi)膜開(kāi)始增生，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)血管內(nèi)膜面積逐漸升高，在28天達(dá)到高值（與假手術(shù)側(cè)及對(duì)照組比較，均P＜0.01）。
　　2.免疫組化染色結(jié)果顯示:(1)正常動(dòng)脈只是極偶然見(jiàn)到Fas陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，F(xiàn)as陽(yáng)性的VSMC細(xì)胞始出現(xiàn)在外膜損傷術(shù)后1天，并逐漸增多，至7天時(shí)達(dá)到高峰，此后表達(dá)逐漸下降，28天時(shí)僅在中膜有少量表達(dá)

4、，但仍高于正常水平(P＜0.05)。(2)凋亡細(xì)胞檢測(cè)在正常動(dòng)脈中TUNEL陽(yáng)性表達(dá)極低，術(shù)后1天表達(dá)開(kāi)始升高，至7天時(shí)達(dá)高峰，后逐漸下降，術(shù)后14天迅速回落，28天降至最低，但仍高于正常水平(P＜0.05)。(3) Fas和凋亡細(xì)胞表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.983，P＜0.01)。
　　3.Real Time RT-PCR結(jié)果顯示正常動(dòng)脈Fas mRNA表達(dá)極低，術(shù)后1天Fas mRNA表達(dá)開(kāi)始升高，7天明顯升高，至14天時(shí)達(dá)到

5、高峰(P＜0.01)。14天后Fas mRNA表達(dá)量開(kāi)始下降，至28天進(jìn)一步下降，但仍明顯高于對(duì)照組及假手術(shù)組(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　1.血管外膜損傷后動(dòng)脈出現(xiàn)內(nèi)膜增生，可能主要由VSMC凋亡與增殖失衡所致，術(shù)后7-14天為凋亡速降的關(guān)鍵時(shí)間窗，術(shù)后28天增生的新生內(nèi)膜面積達(dá)到高值。
　　2.血管外膜損傷導(dǎo)致內(nèi)膜增生過(guò)程中，F(xiàn)as是VSMC凋亡及抗衡血管內(nèi)膜增生的重要因子之一。
　　3.通過(guò)本實(shí)驗(yàn)結(jié)