金蕎麥的提取分離及其抗HBV活性研究.pdf

1、本論文選取了具有防治肝炎或清熱解毒作用的33種中草藥，用重組的含有乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）基因組的人肝癌細胞HepG22.2.15為體外篩選模型，以藥物對HepG22.2.15細胞合成、分泌HBeAg和HBsAg抗原的抑制作用作為篩選指標，進行了抗HBV活性初篩。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所選取的33種中草藥中有7種存在抗HBV活性，其中金蕎麥的活性最強。選定金蕎麥為進一步的研究對象，篩選抗HBV作用的活性部位，為從金蕎麥中

2、分離出抗HBV有效成分或單體化合物的研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)，具體研究內(nèi)容如下：
　　1）金蕎麥、石花、駱駝刺、檳榔等33種中草藥粉碎，60％乙醇熱回流提取，減壓回收溶劑，得到60%乙醇浸膏。
　　2）HepG22.2.15細胞分泌HBeAg和HBsAg規(guī)律的監(jiān)測，結(jié)果顯示，HepG22.2.15細胞HBsAg和HBeAg的分泌量在第8天達到最高值。
　　3）以HepG22.2.15細胞為模型對金蕎麥、石花等33種中草藥進行

3、體外抗HBV活性初步篩選。結(jié)果顯示，金蕎麥、石花、佛甲草、石榴皮、駱駝刺、溪黃草、檳榔7種中草藥的60%乙醇提取物具有較好的體外抗HBV活性。
　　4）選取活性較顯著的金蕎麥、石花、佛甲草、石榴皮及檳榔為實驗對象，在相同濃度梯度（10、20、40μg/mL）下比較這五種中草藥對HepG22.2.15細胞分泌HBsAg、HBeAg的影響。結(jié)果顯示，金蕎麥對HepG22.2.15細胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用明顯高于檳榔、石

4、榴皮、石花、佛甲草，其抑制率均達到50%以上。
　　5）將金蕎麥60%乙醇總提取物A的水溶液，經(jīng)AB-8型大孔吸附樹脂吸附、洗脫等分離手段，最終得到B、C、D、E4個部位。對分離的B、C、D、E部位進行體外抗HBV活性篩選，結(jié)果表明，D部位能夠顯著抑制HepG22.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg，在最大無毒的給藥濃度40μg/mL下，對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為54.8%和53.1%。
　　6）確定有效部位

5、D后，經(jīng)硅膠柱層析分離、氯仿-甲醇洗脫得8個部位：D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7和甲醇部位，經(jīng)體外活性檢測發(fā)現(xiàn)D7有較好的抗HBV作用，無毒濃度下，D7對HBsAg和HBeAg的抑制率分別是52.7%和59.7%。
　　7）利用反相液相色譜C18柱對D7部位進行分離，得兩個組分F、G。:體外活性檢測結(jié)果表明，在最大無毒濃度下，G對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為52.6%和72.3%；陽性對照物苦參素注射液對HBsA

6、g、HBeAg抑制率分別為20.8%和48.5%，G對2.2.15細胞HBsAg、HBeAg的分泌抑制作用強于陽性藥物，兩者具有顯著性差異。
　　本文經(jīng)過對33種中草藥抗HBV活性的篩選，發(fā)現(xiàn)金蕎麥提取物具有很強的抗HBV活性，經(jīng)硅膠柱層析和HPLC分離純化后，與粗提物相比對HBeAg的抑制率提高約20%，說明分離純化后金蕎麥抗HBV活性部位得到富集；活性實驗顯示金蕎麥提取物對HBsAg和HBeAg的抑制率隨濃度的增加呈上升趨勢，