靈芪蠲肝膠囊含藥血清對(duì)PDGF誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及JAK-STAT信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:觀察不同濃度的靈芪蠲肝膠囊含藥血清對(duì)血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞-T6(hepaticstellate cell-T6,HSC-T6)增殖和兩面神激酶-2(janus kinase-2,JAK-2)、信號(hào)傳遞與轉(zhuǎn)錄激活因子-3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT-3)、組織

2、金屬蛋白酶抑制劑-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白量表達(dá)的影響,探討其可能的抗肝纖維化機(jī)制。
　　 方法:1.制備含藥血清:SD大鼠25只,隨機(jī)分為5組,每組5只,分別用生理鹽水(A組,10ml／kg)、復(fù)方鱉甲軟肝片藥液(B組,1.5g／kg)、靈芪蠲肝膠囊藥液小劑量(C1組,2.125g／kg)、中劑量(C2組,4.25g／kg)、大劑量(C3組,8.5g

3、／kg)灌胃7天,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,靜置、離心、滅活、過(guò)濾,取得含藥血清。2.將各組含藥血清按200ml／L分別作用于10ng／ml PDGF刺激的HSC-T6,24、48、72h后用CCK-8法測(cè)定各組HSC-T6的吸光度值并繪制生長(zhǎng)曲線,透射電鏡觀察各組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化,免疫印跡法檢測(cè)24h時(shí)各組細(xì)胞中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白量的表達(dá)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,各組間比較用單因素方差

4、分析,多樣本均數(shù)兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn),應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn):雙側(cè)α=0.05,P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.對(duì)HSC-T6增殖的影響:共培養(yǎng)24h時(shí),與A組比較,B、C2、C3各組藥物血清均可明顯抑制HSC-T6的增殖,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.01)；C1組無(wú)抑制作用(P>0.05)；B、C3組較C2組抑制明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)；B、C3組間抑制無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

5、(P>0.05)。48h時(shí),與A組比較,B、C1、C2、C3各組藥物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)；B、C3組較C1、C2組抑制明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)；B、C3組間抑制無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；C1、C2組間抑制無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；72h時(shí),與A組比較,B、C1、C2、C3各組藥物血清均可抑制HSC-T6的增殖,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)；但B、C1、C2、C3組各組間抑制

6、均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。C1、C2、C3各組藥物血清在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)HSC-T6的抑制作用隨血清中藥物濃度增加呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)。2.透射電鏡下HSC-T6超微結(jié)構(gòu)的改變:共培養(yǎng)24h后,A組細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)正常,核膜結(jié)構(gòu)清晰,染色質(zhì)分布正常,細(xì)胞器豐富,可見(jiàn)大脂滴。B、C1、C2、C3組可見(jiàn)大量不同程度的壞死和凋亡細(xì)胞,其細(xì)胞體積變小,核膜消失,胞質(zhì)內(nèi)空泡增多,細(xì)胞器較少,細(xì)胞核染色質(zhì)固縮,形態(tài)不規(guī)則,可見(jiàn)核碎裂。同一時(shí)間點(diǎn),上述改變

7、在B、C3組最明顯,C2組次之,C1組最輕；且培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng),改變?cè)斤@著。3.共培養(yǎng)24h時(shí)JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表達(dá)量的變化:免疫印跡法顯示,與A組相比,B、C1、C2、C3組大鼠HSC-T6中JAK-2、STAT-3和TIMP-1蛋白表達(dá)量均明顯減少(均p<0.01)；C1組JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋白表達(dá)量均較B組高,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.01)；C2組JAK-2、STAT-3、TIMP-1蛋

8、白表達(dá)量均較B組低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)；C3組JAK-2、TIMP-1蛋白表達(dá)量較B、C2組均降低,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.01),STAT-3蛋白表達(dá)量較B、C2組降低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。
　　 結(jié)論:1.靈芪蠲肝膠囊可以抑制PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6增殖,且作用具有劑量依賴性；2.靈芪蠲肝膠囊能降低JAK-2、STAT-3在活化的HSC-T6中的表達(dá),從而阻斷JAK／STAT信號(hào)通路的傳導(dǎo),