桑天牛幼蟲(chóng)高致病性白僵菌菌株篩選及其致病機(jī)理研究.pdf

1、本文以黃粉蟲(chóng)誘集法從土壤中采集并篩選到了對(duì)桑天牛幼蟲(chóng)具有較高毒性的球孢白僵菌Bb00菌株，并系統(tǒng)研究了其生物學(xué)特性、對(duì)桑天牛的致病性及其影響因子、白僵菌對(duì)桑天牛幼蟲(chóng)的入侵和致病過(guò)程、桑天牛幼蟲(chóng)對(duì)白僵菌入侵和致病的防御反應(yīng)、桑天牛幼蟲(chóng)染病后的病理學(xué)變化，及主要化學(xué)殺蟲(chóng)劑與該菌株的相容性等內(nèi)容。結(jié)果如下： 利用黃粉蟲(chóng)誘集法從不同土壤中分離到球孢白僵菌9株，分離率為45％，并對(duì)桑天牛幼蟲(chóng)進(jìn)行了生物測(cè)定。結(jié)果表明不同菌株的致病力存在差異

2、，其中以Bb00菌株的致病力最強(qiáng)，校正死亡率及感染率分別為100％和86.3％，致死中時(shí)LT<,50>為4.13 d，致死中濃度LC<,50>為3.05×10<'6> m L<'-1>。 該菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)的最適培養(yǎng)基為PPDA，最適溫度和濕度分別為25℃和100％。紫外線照射對(duì)其營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)無(wú)顯著影響。該菌產(chǎn)孢的最適培養(yǎng)基為察氏培養(yǎng)基，2％葡萄糖+1％蛋白胨的混合營(yíng)養(yǎng)液最利于孢子萌發(fā)。孢子萌發(fā)的最適溫度為25℃，最適濕度為100％。紫

3、外線對(duì)孢子的萌發(fā)有較強(qiáng)的抑制作用，但光照對(duì)其影響不顯著。 白僵菌Bb00菌株不能侵染桑天牛卵，對(duì)成蟲(chóng)有一定的侵染力，但侵染率不高，僅為24.0％。Bb00菌株對(duì)桑天牛幼蟲(chóng)產(chǎn)生致病作用的最適溫度為25℃，最適濕度為100％。察氏培養(yǎng)基上傳代，會(huì)導(dǎo)致菌株致病力的降低，而通過(guò)桑天牛幼蟲(chóng)傳代培養(yǎng)可以提高菌株的致病力。 桑天牛幼蟲(chóng)接菌后20～24h，孢子即可穿透體壁，之后進(jìn)入血腔并大量繁殖，逐漸侵染體腔內(nèi)的組織與器官，直至寄主死亡

4、。寄主在遭受真菌入侵時(shí)受到一定的損傷，其免疫互作使酚氧化酶活性先迅速上升，但隨后因菌株的適應(yīng)性增強(qiáng)而使酚氧化酶活性開(kāi)始下降。白僵菌經(jīng)過(guò)數(shù)次在普通察氏培養(yǎng)基上傳代比在桑天牛幼蟲(chóng)上傳代可引起染病桑天牛幼蟲(chóng)血淋巴內(nèi)更高的酚氧化酶活性，各菌株引起的天牛幼蟲(chóng)酚氧化酶活性出現(xiàn)高峰的時(shí)間與其LT<,50>具有一定的相關(guān)性，反應(yīng)了不同的侵染速度；同時(shí)各菌株酚氧化酶活性高峰值也與LC<,50>高度相關(guān)。桑天牛幼蟲(chóng)的血細(xì)胞對(duì)侵入體內(nèi)的白僵菌的菌絲段具有黏附

5、、吞噬、囊包、聚集及形成結(jié)節(jié)等反應(yīng)，高峰期發(fā)生在接種后2～2.50d，參與防御反應(yīng)的血細(xì)胞主要是粒細(xì)胞和漿細(xì)胞。但由于菌絲段在血液中大量增殖，最終血細(xì)胞對(duì)白僵菌只起暫時(shí)的阻礙和抑制作用，不能從根本上消除白僵菌的發(fā)展。 桑天牛幼蟲(chóng)感染白僵菌后，其取食量、平均體重增加量和食物利用率均比健康蟲(chóng)體降低。呼吸強(qiáng)度和蛋白質(zhì)含量的變化表現(xiàn)為先上升而后迅速下降。但氨基酸總量的變化則出現(xiàn)先下降而后上升的趨勢(shì)，不同種類的氨基酸含量變化情況不一致。

6、 桑天牛幼蟲(chóng)被白僵菌侵染后，為抵御外界干擾，其機(jī)體內(nèi)SOD、POD和CAT活性在接種后初期迅速提高，但在接種后期均出現(xiàn)不同程度下降。桑天牛幼蟲(chóng)感染白僵菌后，血淋巴主要解毒酶羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性變化均表現(xiàn)為先上升而后又逐漸下降。而白僵菌對(duì)乙酰膽堿酯酶活力的影響則表現(xiàn)為先抑制后激活再抑制再激活再抑制。白僵菌侵入昆蟲(chóng)血腔后，隨著菌絲在體腔內(nèi)大量繁殖，受侵的各器官和組織均發(fā)生明顯的病變，如皮細(xì)胞層和表皮分離、脂肪體松散、消化