一株對(duì)桃蚜具有高致病性的絲狀真菌的分離、篩選、鑒定及應(yīng)用研究.pdf

1、桃蚜是我國(guó)農(nóng)作物上最為常見(jiàn)、同時(shí)也是最難防治的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)之一，可侵染寄主多達(dá)400余種，且在設(shè)施作物上可以取食任何植株，還可引發(fā)煤污病，傳播植物病毒病，導(dǎo)致農(nóng)作物大量減產(chǎn)。隨著我國(guó)農(nóng)業(yè)的不斷發(fā)展，優(yōu)勢(shì)品種的單一種植，高密度連作等耕作環(huán)境的惡化，以及化學(xué)藥劑的大量使用等因素導(dǎo)致桃蚜的為害逐年嚴(yán)重。本文通過(guò)在秦嶺原始森林中采集僵死昆蟲(chóng)，并從中分離篩選出對(duì)桃蚜具有高致病性的生防真菌，并對(duì)所得菌株進(jìn)行鑒定，并對(duì)其液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化和對(duì)溫室桃蚜的藥

2、效評(píng)價(jià)進(jìn)行了研究。主要研究成果如下:
　　本研究從陜西省秦嶺深山原始森林土壤中采集到僵死蟲(chóng)101只，包括昆蟲(chóng)綱Insecta、倍足綱Diplopoda、唇足綱Chilopoda和蛛形綱Arachnoidea等4個(gè)綱9個(gè)目，其中有5個(gè)目屬于昆蟲(chóng)綱Insecta。通過(guò)分離與純化共獲得真菌菌株50株，初步編號(hào)為菌株1-50。其中，從昆蟲(chóng)綱Insecta昆蟲(chóng)中分離得到的真菌菌株為44株，占菌株總數(shù)的88％。
　　利用實(shí)驗(yàn)室未施藥小白

3、菜上的桃蚜對(duì)供試菌株進(jìn)行了致病性初步篩選，獲得對(duì)桃蚜具有侵染性的菌株45株，從中篩選出累計(jì)死亡率和僵蟲(chóng)率均達(dá)到30％以上的菌株10株，通過(guò)對(duì)其進(jìn)一步分析，最終篩選出對(duì)桃蚜侵染活性最強(qiáng)的菌株BQ-63。最適孢濃度的篩選試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株BQ-63孢濃度為108孢子/mL時(shí)累計(jì)死亡率、校正死亡率和僵蟲(chóng)率達(dá)到最高，分別為89.53％，90.10％和89.84％。
　　本研究采用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的鑒定方法鑒定菌株BQ-63。以《昆

4、蟲(chóng)真菌學(xué)》的檢索表作為對(duì)比依據(jù)，初步確定該菌株屬白僵菌屬Beauveria。采用18S rDNA鑒定與ITS序列鑒定相結(jié)合的方法對(duì)菌株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，獲得基因片段長(zhǎng)度分別為1300 bp和547 bp，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中分別進(jìn)行BLAST比對(duì)，獲得登錄號(hào)分別為KU240022和KU240023。由18S rDNA鑒定和ITS序列鑒定構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示，該菌株均與球孢白僵菌Beauveria bassiana在同一分支上，其同源性均

5、達(dá)99％以上，因而鑒定菌株BQ-63為球孢白僵菌B.bassiana。同時(shí)，對(duì)供試菌株BQ-63的生長(zhǎng)狀況及產(chǎn)孢量進(jìn)行測(cè)定，生長(zhǎng)到第7d菌落直徑為42.15mm，培養(yǎng)至15d時(shí)測(cè)得其產(chǎn)孢量為3.65×108孢子/皿，其產(chǎn)孢量較大且產(chǎn)孢速度快。
　　在本項(xiàng)研究中，選用單因素變量分析法，以基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，進(jìn)行菌株BQ-63液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化，包括碳源、氮源、微量元素、pH等四個(gè)方面。最終確定其培養(yǎng)條件為以30 g/L的葡萄糖作為

6、碳源，15g/L的酵母浸粉作為氮源，并添加0.1 g/L的K+、0.1g/L的Mg2+、0.2 g/L的Mn2+作為微量元素，pH值為自然pH。在該條件下培養(yǎng)4d后，菌株產(chǎn)孢量為6.44×108孢子/mL，菌絲干重為10.82 g/L，優(yōu)化后產(chǎn)孢量和菌絲干重都有顯著提高，優(yōu)化效果明顯。
　　本研究選用70％啶蟲(chóng)脒水分散粒劑、30％醚菊酯水乳劑、25％噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑、20％吡蟲(chóng)啉可濕性粉劑、5％除蟲(chóng)菊素乳油、0.5％藜蘆堿可溶液劑