犬血清弓形蟲IgG抗體快速診斷金標(biāo)試紙條的研制.pdf

1、弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)引起的以孕婦(畜)流產(chǎn)、弱胎、畸胎、死胎和兒童(幼畜)生長(zhǎng)受阻、死亡等為特征的一種人畜共患病。該病廣泛存在于世界各地，弓形蟲宿主范圍廣泛，人和犬為其中間宿主，都存在一定的感染率，據(jù)報(bào)道人的弓形蟲感染與養(yǎng)犬存在一定關(guān)系。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已建立多種檢測(cè)弓形蟲抗原或抗體的方法，如病原學(xué)檢測(cè)、間接血凝檢測(cè)、間接免疫熒光試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、PCR檢測(cè)等，但

2、這些方法操作較復(fù)雜、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)且需要一定的儀器設(shè)備，在臨床推廣應(yīng)用中受到一定的限制。因此，建立一種簡(jiǎn)易、快速、特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法，專用于犬弓形蟲病的血清學(xué)診斷與流行病學(xué)調(diào)查，不僅有助于了解犬感染情況，同時(shí)對(duì)于阻斷弓形蟲由犬向人的傳播也有重要的意義。 本研究用弓形蟲速殖子腹腔感染昆明小鼠分別制備了弓形蟲可溶性抗原和代謝分泌抗原，并用制備的代謝分泌抗原免疫健康犬獲得了犬弓形蟲陽(yáng)性血清；采集健康犬的血清，用硫酸銨鹽析法和葡聚糖G-200柱

3、層析法純化制得犬IgG，以其常規(guī)免疫健康家兔，當(dāng)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)效價(jià)達(dá)到1:64以后收集兔血清，并經(jīng)辛酸-硫酸銨鹽析提純制得兔抗犬IgG；用檸檬酸三鈉還原法燒制直徑為20nm的膠體金顆粒，以膠體金顆粒標(biāo)記兔抗犬IgG制作成金標(biāo)墊，標(biāo)記的最適PH值為9.0，1ml膠體金的最適標(biāo)記量為12μg，將弓形蟲可溶性抗原和羊抗兔IgG分別包被于硝酸纖維素膜上做為檢測(cè)線與質(zhì)控線制成免疫層析試紙條。當(dāng)犬血清中的弓形蟲IgG抗體與試紙條上的金標(biāo)抗體(

4、兔抗犬IgG)結(jié)合后沿著硝酸纖維素膜移動(dòng)，在膜上的檢測(cè)線與質(zhì)控線處發(fā)生特異性抗原抗體反應(yīng)形成肉眼可見的紅色線條。實(shí)驗(yàn)表明膠體金試紙條最佳檢測(cè)條件：弓形蟲抗原的點(diǎn)膜濃度為2.5mg/ml，羊抗兔IgG點(diǎn)膜濃度為0.75mg/ml，膠體金標(biāo)記兔抗犬IgG作1:2稀釋時(shí)的檢測(cè)帶清晰且背景較淺。用所研制的試紙條與蘭州獸研所生產(chǎn)的弓形蟲間接血凝試劑盒比較，同時(shí)檢測(cè)從臨床病例中按隨機(jī)抽樣法采集的94份寵物犬血清，及6份感染犬血清。94份寵物犬血清中

5、，試紙條法檢出3份，間接血凝試劑盒檢出4份；6份感染犬血清中，試紙條法檢出4份，間接血凝試劑盒也檢出4份，且這4份血清為相同血清，這表明兩者對(duì)感染犬血清檢測(cè)符合率為100％。總檢測(cè)結(jié)果表明：兩法總符合率為99.0％(99/100)，其中陽(yáng)性和陰性符合率分別為87.5％(7/8)和98.9％(92/93)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研制出的膠體金免疫層析試紙條和IHA試劑盒符合性好，檢測(cè)犬血清中的弓形蟲IgG抗體重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、快速，只需