廣西PRRSV地方流行毒株的分離鑒定及對(duì)高免血清反應(yīng)研究.pdf

1、PRRS是流行最廣的接觸性傳染病，給全世界的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。特別是2006年以來(lái)， HP-PRRSV肆虐中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)，給中國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的創(chuàng)傷。廣西是養(yǎng)豬大省，PRRSV是影響?zhàn)B豬業(yè)的主要病原之一，對(duì)PRRSV的防控至關(guān)重要。
　　(1)為了了解廣西PRRSV流行趨勢(shì)、基因遺傳變異規(guī)律，為該病的防控提供理論依據(jù)。本研究通過(guò)RT-PCR方法對(duì)2013-2014年采集的廣西地區(qū)各地市疑似PRRSV感染的475份樣品進(jìn)行病原

2、檢測(cè)，陽(yáng)性率為27.2％，說(shuō)明廣西存在PRRSV流行;對(duì)檢測(cè)為PRRSV陽(yáng)性的樣品在MARC-145細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離鑒定，共分離獲得廣西PRRSV流行毒株65株。通過(guò)RT-PCR方法擴(kuò)增、測(cè)序31株流行毒株的NSP2基因的高變區(qū)和58株流行毒株ORF5基因序列。31株P(guān)RRSV NSP2基因高變區(qū)序列核苷酸同源性為73.4～100％，推導(dǎo)編碼的氨基酸同源性為83.1～100％，與NCBI部分參考毒株的相應(yīng)核苷酸序列同源性為41.4～

3、99.5％，推導(dǎo)編碼氨基酸同源性為28.4～99.2％，NSP2普遍存在1+29個(gè)氨基酸缺失，缺失位置與高致病性毒株JXA1一致，GXYL1403d毒株的NSP2存在124個(gè)氨基酸缺失;NSP2基因高變區(qū)核苷酸遺傳進(jìn)化分析表明31株P(guān)RRSV均與HP-PRRSV分布于同一分支上，表明31株P(guān)RRSV均為HP-PRRSV。58株流行毒株ORF5基因核苷酸之間同源性為86.4～100％，推導(dǎo)編碼的氨基酸同源性為84.5～100％，與NCBI

4、部分參考毒株的相應(yīng)核苷酸序列同源性為62.9～100％，推導(dǎo)編碼氨基酸同源性為56.6～100％，ORF5基因核苷酸遺傳進(jìn)化分析表明58株P(guān)RRSV中，GXYL1403a和GXLB1403這兩株毒株與經(jīng)典毒株VR-2332分布于同一分支，GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306與中間型毒株Em2007、HB-1/2(sh)-2002等分布于同一分支，其他的53株與HP-PRRSV分布于同一分支。序列分析和遺傳進(jìn)化分析結(jié)果

5、說(shuō)明了廣西流行多為高致病性PRRSV亞型毒株，但是經(jīng)典型和中間過(guò)渡型毒株仍有少量流行。
　　(2)對(duì)NSP2和GP5序列分析有特征性的4個(gè)毒株(GXYL1403d、GXGG1305a、GXGG1305b和GXGG1306)進(jìn)行全基因測(cè)定、序列比較和遺傳進(jìn)化。結(jié)果表明，GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306這3株病毒全基因?yàn)?5300nt，GXYL1403d為15018nt，4株病毒全基因組核苷酸同源性為96.3～

6、99.6％，與參考序列的同源性為60.7～98.1％。NSP2基因氨基酸序列比對(duì)結(jié)果表明GXYL1403d分別在481和511～635位缺失1個(gè)和123個(gè)氨基酸，這個(gè)位置的缺失是從未報(bào)道過(guò)的;GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306缺失1+29個(gè)氨基酸，缺失位置與高致病性毒株JXA1一致。變異最大的GP5和GP3氨基酸比對(duì)結(jié)果表明，GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306這三株病毒與JXA1相比，存在多個(gè)

7、氨基酸位點(diǎn)的突變?；谌L(zhǎng)序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)GXYL1403d分布于HP-PRRSV分支，GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306分布于中間型。以上這些結(jié)果說(shuō)明了中間型毒株與JXA1和CH-1a相比存在多處氨基酸位點(diǎn)突變。
　　(3)為研究分離的PRRSV毒株對(duì)高免血清的易感性、GP5氨基酸變異與中和抗體滴度差異相關(guān)性。本研究用抗JXM100毒株的免疫血清對(duì)2013-2014年廣西30株P(guān)RRSV分離株和1株

8、疫苗株進(jìn)行中和抗體滴度差異性試驗(yàn)。結(jié)果表明2013-2014年廣西的PRRSV流行株的中和抗體滴度高低不一，31株P(guān)RRSVs根據(jù)中和抗體滴度差異分為3個(gè)型，即敏感型(1∶16≤VN titers＜1∶64之間)、中等抵抗型（1∶16＜VN titers≤1∶8）和完全抵抗型(VNtiters＜1∶8)。通過(guò)分析GP5氨基酸序列與中和抗體滴度差異性結(jié)果表明:GP5氨基酸同源性的高低與中和抗體滴度高低不存在直接的相關(guān)性。進(jìn)一步比較GP5序