遲緩愛德華菌弱毒株的分離鑒定及對羅非魚的免疫保護效果研究.pdf

1、遲緩愛德華菌（Edwardsiella tarda）廣泛分布在自然界，尤以水中多見，對人和動物具有一定的致病性。遲緩愛德華菌是危害水產養(yǎng)殖業(yè)的重要病原菌，該菌能感染魚類、貝類、兩棲類、爬行類等多種水生動物，不同國家和地區(qū)都報道過由遲緩愛德華菌感染引發(fā)的病害，給水產養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經濟損失。目前預防和治療愛德華菌病的主要方法仍是消毒劑、抗生素等，但由其引起的細菌耐藥性、食品藥物殘留等問題越來越嚴重。
　　本研究從革胡子鯰魚中分離到一

2、株細菌（TANX），并對其進行鑒定與生物學特性分析。結果顯示，TANX菌株為遲緩愛德華菌，對健康羅非魚（Tilapia Mossambica）人工感染試驗表明，該分離菌株的致病力非常弱，為天然弱毒株。用PCR方法檢測該菌株中遲緩愛德華菌6種常見毒力基因檸檬酸裂解酶（citC）、鞭毛蛋白（fimA）、谷氨酸脫羧酶同工酶（gadB）、過氧化氫酶（KatB）、殺傷因子（mukF）、TTSS基因（esrB）基因，發(fā)現(xiàn)TANX菌中只含有citC和

3、mukF兩種毒力基因，而強毒株含有citC、fimA、gadB、KatB、mukF、esrB。fimA基因起黏附、入侵宿主細胞的功能;gadB、katB、esrB基因使遲鈍愛德華氏菌能在宿主細胞內存活并超越宿主的防御屏障(依賴血清和巨噬細胞介導的殺傷作用)，TANX菌株不含這些毒力基因，致病力較弱。藥敏試驗結果顯示TANX菌株對頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、氧氟沙星、左氟沙星等藥物敏感，對青霉素G、氨芐西林、四環(huán)素、多

4、粘菌素B等藥物耐受。為了研究遲緩愛德華菌弱毒疫苗對羅非魚（Oreochromis niloticus）免疫保護效果，本試驗制備了遲緩愛德華菌弱毒疫苗（LAV）和福爾馬林強毒株滅活疫苗(FKC)，利用腹腔注射、口服兩種途徑免疫羅非魚，定期采集各組羅非魚的頭腎和脾臟以及血清，檢測各組抗體水平，血清中SOD（超氧化物歧化酶）、AKP（堿性磷酸酶）、ACP（酸性磷酸酶）的活性，檢測頭腎、脾臟中干擾素IFN、白介素IL-1、腫瘤壞死因子TNF、C

5、aspase3的相對表達量；最后對各組羅非魚進行攻毒試驗，計算各組的相對免疫保護率。結果表明，實驗組抗體水平顯著高于對照組（P＜0.01），弱毒疫苗(LAV)組抗體水平高于滅活疫苗(FKC)組，差異不顯著，免疫后3周和4周，LAV注射組的抗體水平顯著高于FKC組（P＜0.05）；酶活力檢測結果顯示，LAV組的ACP、AKP活力差異不顯著，F(xiàn)KC注射組的SOD活力顯著高于對照組和FKC口服組（P＜0.05）；熒光定量檢測結果表明，免疫28

6、天，IFN在頭腎中的表達量LAV組明顯高于FKC組（P＜0.01），而FKC組IL-1在頭腎中的表達量明顯高于LAV組（P＜0.01），LAV組頭腎中IFN、TNF、Caspase3的表達量和脾臟中Caspase3的表達量高于FKC組，均顯著高于對照組（P＜0.05）；免疫保護率結果表明，LAV注射、口服組的相對保護率分別為90.5％、63.6%，F(xiàn)KC注射、口服組的相對保護率分別為76.1%、59%，免疫保護率均顯著高于對照組（P＜0