EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中相關(guān)基因表達的檢測與分析.pdf

1、目的：課題組前期采用cDNA基因芯片技術(shù)（Agilent人類全基因組表達譜芯片技術(shù)）已經(jīng)篩選出EB病毒誘導(dǎo)淋巴細胞轉(zhuǎn)化過程中可能具有關(guān)鍵作用的4個分子，分別是E2F1、PLK1、BIRC5、PTPN11。本實驗通過實時定量PCR和Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)化淋巴母細胞及其配對的正常人淋巴細胞中E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11表達差異情況，進一步驗證前期基因芯片結(jié)果，為研究EB病毒誘導(dǎo)淋巴細胞轉(zhuǎn)化的分子機制提供實驗依據(jù)

2、。
　　方法：從5例健康成人外周靜脈血中分離出淋巴細胞，在體外利用EBV誘導(dǎo)B淋巴細胞轉(zhuǎn)化建立永生化的淋巴母細胞系。提取轉(zhuǎn)化淋巴母細胞及其配對的健康人淋巴細胞的總RNA和總蛋白，應(yīng)用實時定量PCR和Western blot方法，分別檢測E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例轉(zhuǎn)化淋巴母細胞及其匹配的健康人淋巴細胞中的表達情況。
　　結(jié)果：成功建立EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細胞系，得到了5例健康人轉(zhuǎn)化淋巴母細胞，檢測了E

3、2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例轉(zhuǎn)化的淋巴母細胞及其配對的健康人淋巴細胞中的表達情況。
　　E2F1基因在兩種細胞中均表達，與正常人淋巴細胞相比，轉(zhuǎn)化細胞中E2F1的mRNA表達上調(diào)3.161倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Western blot結(jié)果顯示，與正常人淋巴細胞相比，E2F1在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白表達上調(diào)1.850倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　PLK1基因在兩種細胞中均表達，與

4、正常人淋巴細胞相比，淋巴母細胞中PLK1的mRNA表達上調(diào)11.329倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；Western blot結(jié)果顯示，與正常人淋巴細胞相比，PLK1在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白表達上調(diào)8.140倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。
　　BIRC5基因在兩種細胞中均表達，相比正常人淋巴細胞，淋巴母細胞中BIRC5的mRNA表達上調(diào)7.921倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；Western blot結(jié)果顯示，

5、與正常人淋巴細胞相比，BIRC5在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白表達上調(diào)2.065倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　PTPN11基因在兩種細胞中均表達，與正常人淋巴細胞相比，淋巴母細胞中PTPN11的mRNA表達下調(diào)4.760倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Western blot結(jié)果顯示，在正常人淋巴細胞和轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中PTPN11的蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. E2F1、PL