犬瘟熱、細小病毒病、腺病毒病(Ⅰ型)三聯(lián)活疫苗的研制.pdf

1、犬瘟熱(Canine distemper，CD)、犬細小病毒(Canine parvovirus，CPV)病及犬腺病毒(Canine adenovirus，CAV)病是當前對我國養(yǎng)犬業(yè)危害嚴重的3種病毒性傳染病。常引起大批犬、貂和狐等動物發(fā)病，經(jīng)濟損失慘重。犬瘟熱病毒(Caninedistemper virus，CDV)可以感染包括大熊貓、小熊貓以及獅、虎、豹等食肉目所有8個科、靈長目的獼猴屬、偶蹄目豬科和鰭足目海豹科等多種動物。CPV

2、可引起犬出血性腸炎與心肌炎，此外，CPV還可引起虎、獅、果子貍和猴等野生動物的感染。CAV不僅流行于我國和世界各地家養(yǎng)的犬、狐中，而且廣泛地流行于野生的狐、熊、郊狼和浣熊等動物中。
　　疫苗免疫被認為是犬病防控的最直接有效措施。當前，廣泛應(yīng)用的主要有單價或多價弱毒苗。雖然對于防控犬的重大疫病起到了積極作用，但是還時有疫情發(fā)生的報道。同時，目前使用的這些的疫苗大部分為國外疫苗的復制品，其使用的疫苗株與我國優(yōu)勢流行株之間抗原差異顯著。

3、因此，研制適合國內(nèi)流行毒株的疫苗已迫在眉睫。鑒于此，開展以下研究:
　　CDV、CPV及CAV的分離鑒定:將發(fā)病犬的病料組織等經(jīng)過處理后，分別接種雞胚成纖維細胞（Chicken embryo fibroblast，CEF）、CRFK及MDCK細胞進行傳代培養(yǎng)，并進行病毒形態(tài)學、PCR及動物回歸試驗鑒定等一系列鑒定。CDV、CPV及CAV的細胞培養(yǎng)物上清電鏡觀察分別可見典型的副黏病毒粒子、細小病毒粒子和腺病毒粒子。動物回歸試驗顯示，

4、三種分離株分別可導致犬出現(xiàn)明顯的相應(yīng)的臨床癥狀。PCR和序列分析進一步確定分離株分別為CDV、CPV和CAV的野毒株，并分別命名為CDV-YB、CPV-YN和CAV-H。
　　CDV、CPV及CAV的致弱研究:CDV-YB株分別經(jīng)CEF、Vero和CEF細胞連續(xù)傳70、20和15代，CPV-YN和CAV-H分別經(jīng)CRFK和MDCK細胞連續(xù)傳至110代，病毒滴度逐漸提高并分別穩(wěn)定在106.5 TCID50/mL、106 TCID50

5、/mL和107.5 TCID50/mL左右。并且三種病毒對犬的致病力隨著傳代次數(shù)的增加而逐漸降低。動物回歸試驗結(jié)果進一步表明成功獲得致弱毒株，分別命名為CDV-YBR、CPV-YNR和CAV-HR。
　　CDV、CPV及CAV致弱毒株的免疫原效力評價:分別將三種致弱毒株免疫犬，并用親本強毒株進行攻毒保護試驗，結(jié)果表明三種致弱毒株均可誘導犬產(chǎn)生理想的中和抗體，并對同源強毒株的攻擊提供完全保護。
　　CD、CPV病及CAV?。á?/p>

6、型）三聯(lián)活疫苗研制:將致弱毒株CDV-YBR、CPV-YNR和CAV-HR按照比例混勻，加入穩(wěn)定劑制備三聯(lián)弱毒疫苗，并對其開展免疫學評價。結(jié)果表明:三聯(lián)活疫苗具有良好的安全性和免疫性原性。與相應(yīng)單苗相比，二者在免疫效力方面無明顯差異。與同類商品化五聯(lián)活疫苗相比，兩者在安全性基本一致;本研究中三聯(lián)苗在免疫效力方面略勝一籌;在病毒含量和免疫持續(xù)期方面均優(yōu)于商品化疫苗;此外對懷孕母犬進行免疫具有絕對的安全優(yōu)勢。
　　目前，國內(nèi)應(yīng)用的弱毒

7、聯(lián)苗一部分是國外疫苗的復制品，另一部分疫苗種毒直接來自于國外，這與國內(nèi)目前流行的野毒株在基因水平和抗原性等生物學特性方面存在顯著差異，而且，目前商品化疫苗均不適合于懷孕母犬的免疫。而本研究三聯(lián)弱毒苗的疫苗株均來源于國內(nèi)優(yōu)勢流行株經(jīng)致弱而成，有獨立知識產(chǎn)權(quán)，且制各的疫苗具有良好的安全性和免疫原性，并對懷孕母犬絕對安全。該三聯(lián)苗已申報新獸藥批號，目前處于復核試驗階段。本研究填補了我國犬類國產(chǎn)疫苗的空白，為我國犬的重要病毒病的防控提供了物質(zhì)基